Ποια είναι η ανάλυση PCR για τη φυματίωση

Μια καινοτόμος μέθοδος για την ανίχνευση μικροοργανισμών, που εφευρέθηκε από τον επιστήμονα Cary Mullis στα τέλη του περασμένου αιώνα - ανάλυση PCR. Έλαβε για τα γραπτά του το βραβείο Νόμπελ. Η διαδικασία αυτή ονομάζεται αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης. Συνίσταται στην αποκατάσταση του τύπου μικροοργανισμού στο παρεχόμενο βιολογικό υλικό χρησιμοποιώντας σύντομα θραύσματα DNA. Αυτό σας επιτρέπει να εντοπίσετε τη λοίμωξη σε πρώιμο στάδιο και να ξεκινήσετε αμέσως τη θεραπεία χωρίς να οδηγήσετε σε σοβαρά συμπτώματα και επιπλοκές.

Ποια είναι η ανάλυση

Η διάγνωση με PCR είναι να ληφθούν τμήματα παθογόνου DNA από βιολογικό υλικό και να ευθυγραμμιστούν με τη σωστή αλυσίδα. Αυτό επιτρέπει την αναγνώριση του μικροοργανισμού στον οποίο ανήκουν τα κύτταρα.

Η διαδικασία διεξάγεται σε τρία στάδια:

1. Συλλογή βιολογικού υλικού.
2. Ταυτοποίηση και ευθυγράμμιση του DNA.
3. Αναγνώριση της λοίμωξης.

Η μελέτη αυτή απαιτεί ειδικό ιατρικό εξοπλισμό - ενισχυτικό. Είναι εξοπλισμένο με μια κάμερα, όπου το υλικό που μελετάται αλληλεπιδρά με υψηλή θερμοκρασία και χημικά ένζυμα. Στην έξοδο, ο τεχνικός του εργαστηρίου έχει μακρά αλυσίδα DNA του αιτιολογικού παράγοντα, εάν υπάρχει στο ανθρώπινο σώμα.

Πώς να προετοιμαστείτε για τη διάγνωση

Η ανάλυση PCR είναι μια σύνθετη διαδικασία γενετικής μηχανικής που απαιτεί ακρίβεια και σοβαρότητα τόσο από τους τεχνικούς εργαστηρίων όσο και από τους ασθενείς. Ένας μεγάλος ρόλος στην ορθότητα των αποτελεσμάτων της ανάλυσης διαδραματίζει η προετοιμασία της διαδικασίας, δηλαδή η σωστή συλλογή υλικού.

Οι κύριες πηγές πληροφοριών σχετικά με την ασθένεια είναι:

Μπορούν να χρησιμοποιηθούν και άλλες επιλογές, τα υγρά, αν χρειαστεί, λαμβάνονται για ανάλυση από διαφορετικά όργανα.

Για τον ασθενή, υπάρχουν ορισμένοι κανόνες που πρέπει να τηρούνται πριν από τη διαδικασία. Εάν υπάρχει εξέταση αίματος, απαγορεύεται για 8 ώρες πριν από τη συλλογή:

• να τρώτε φαγητό.
• να καπνίζουν.
• να πίνουν αλκοολούχα ποτά.
• πάρτε φάρμακα μέσα.

Το βράδυ, πριν από τη συλλογή των πτυέλων, το φάρμακο είναι μεθυσμένο για να το λεπτύνει και να διευκολύνει την απόχρωση. Το πρωί, συλλέγετε το υλικό μετά από πλήρη υγιεινή της στοματικής κοιλότητας.

Τα ούρα συλλέγονται σε αποστειρωμένο βάζο το πρωί με άδειο στομάχι, μετά το πλύσιμο, πριν από τη λήψη οποιουδήποτε φαρμάκου.

Εάν ένα άτομο παίρνει αντιβιοτικά, τότε η ανάλυση της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης πρέπει να αναβληθεί, διαφορετικά το αποτέλεσμα της PCR δεν είναι αξιόπιστο. Τα πτύελα ή το αίμα θα πρέπει να χορηγούνται δύο εβδομάδες μετά το πέρας της θεραπείας.

Πώς γίνεται η διαδικασία ταυτοποίησης βακτηρίων

Εν συντομία, η διαδικασία είναι να απομονωθεί ένα τμήμα του DNA. Η χρήση σύγχρονων μεθόδων γενετικής μηχανικής μας επιτρέπει να προσδιορίσουμε τον τύπο του μικροοργανισμού. Επιπλέον, το υλικό για την ανάλυση χρειάζεται μια μικρή ποσότητα.

Από τεχνική άποψη, αυτή είναι μια πολύ περίπλοκη διαδικασία, αλλά απαιτεί λιγότερο χρόνο από τις κλασσικές βακτηριολογικές μελέτες. Τα παθογόνα δεν χρειάζεται να απομονώνονται από το βιολογικό υλικό, δεν υπάρχει λόγος να αναπτυχθούν για αρκετές εβδομάδες. Την ημέρα της παράδοσης, ο ασθενής μπορεί ήδη να γνωρίζει το αποτέλεσμα της ανάλυσής του.

Η όλη διαδικασία της PCR προχωρεί σταδιακά:

1. Οι εργασίες βρίσκονται σε εξέλιξη με την πρωταρχική μορφή DNA, η οποία σε υψηλή θερμοκρασία, κοντά στους 100 βαθμούς, χωρίζεται σε δύο αλυσίδες.
2. Η θερμοκρασία μειώνεται, τα νήματα συνδέονται με τα θραύσματα νουκλεϊκού οξέος - το αστάρι.
3. Έχει επιμηκυνθεί - σύνθεση μοριακής δομής.

Ολόκληρη η σύνοδος περιλαμβάνει περίπου τριάντα τέτοιες διαδικασίες, επαναλαμβάνοντας έναν κύκλο ως αλυσιδωτή αντίδραση. Αυτό είναι απαραίτητο για να δημιουργηθεί ο αριθμός των κυττάρων στα οποία τα προκύπτοντα βακτήρια γίνονται αναγνωρίσιμα.

Συμπέρασμα της μελέτης

Περιγραφή του αποτελέσματος της PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης) δίνει έναν γιατρό φυματίωσης, είναι απλός ή αναπτυγμένος. Στην πρώτη περίπτωση, η περιγραφή θα περιέχει μόνο πληροφορίες σχετικά με την παρουσία ή την απουσία κολλητών Koch. Εάν η αποκωδικοποίηση είναι λεπτομερής, από αυτό μπορείτε να μάθετε την έκταση της νόσου, την εστίασή της. Σύμφωνα με αυτά τα κριτήρια, είναι δυνατόν να προσδιοριστεί η καταλληλότερη θεραπεία για τη φυματίωση σε κάθε περίπτωση.

Η ανάλυση πολυμεράσης της αλυσιδωτής αντίδρασης δεν κάνει διάκριση μεταξύ ζώντων και νεκρών παθογόνων και μιλά μόνο για την παρουσία τους. Ως εκ τούτου, είναι λογικό να περάσει μια δεύτερη δοκιμασία για τη φυματίωση μόνο 3-4 εβδομάδες μετά το πέρασμα της θεραπείας που έχει συνταγογραφηθεί από το γιατρό.

Εάν το αποτέλεσμα είναι θετικό, η επισήμανση "Mycobacterium tuberculosis" καταλήγει στο συμπέρασμα. Εάν υπάρχει αρνητικό αποτέλεσμα, δίπλα στο βιολογικό όνομα των βακτηρίων υπάρχει ένα σήμα "δεν ανιχνεύεται". Οι αναλύσεις μπορεί να είναι ψευδώς θετικές. Αυτό συμβαίνει σπάνια - σε περίπτωση παραβίασης της τεχνικής διεξαγωγής μελετών PCR ή παρουσία μη βιώσιμων μικροοργανισμών. Το τελικό συμπέρασμα για την ασθένεια μπορεί να γίνει μόνο από γιατρό της φυματίωσης.

Πλεονεκτήματα της μεθόδου

Η διάγνωση της φυματίωσης PCR έχει αποκτήσει δημοτικότητα για πολλούς λόγους. Έχει πολλά πλεονεκτήματα, όπως:

1. Ακρίβεια της έρευνας. Κατά την ανάλυση της τεχνολογίας, είναι δυνατόν να εντοπιστούν τα βακτηρίδια, ακόμη και αν είναι παρόντα σε μικρές ποσότητες.
2. Γρήγορο αποτέλεσμα. Η όλη διαδικασία από τη συλλογή του υλικού μέχρι το τελικό συμπέρασμα διαρκεί περίπου 5 ώρες. Σε σύγκριση με τη σπορά, πρέπει να περιμένετε μέχρι και αρκετές εβδομάδες.
3. Πλήρης ασφάλεια για το άτομο, σε αντίθεση με την φθορογραφία με την ακτινοβολία του.
4. Χρησιμοποιείται οποιοδήποτε υγρό βιοϋλικό. Για την εφαρμογή της PCR στην πνευμονική φυματίωση, τα πτύελα δίνουν τις πιο ακριβείς πληροφορίες · στη φυματιώδη μηνιγγίτιδα λαμβάνεται ένα δείγμα από το νωτιαίο μυελό. Μια εξέταση αίματος βοηθά στην αναγνώριση των τοπικών εστιών της λοίμωξης.
5. Η ευαισθησία των βακτηρίων στα αντιβιοτικά δοκιμάζεται. Αυτό σας επιτρέπει να συνταγογραφήσετε τη σωστή θεραπεία.
6. Πρόωρη διάγνωση. Μπορείτε να μάθετε για την παρουσία της νόσου πριν από την εμφάνιση των συμπτωμάτων της.

Εκτός από τις θετικές πτυχές, υπάρχουν επίσης μειονεκτήματα. Το κύριο είναι η τιμή. Η ανάλυση της PCR δεν είναι φθηνή, η οποία συνδέεται με τη χρήση δαπανηρού εξοπλισμού. Ένα άλλο μειονέκτημα είναι η ανάγκη να περιμένουμε τον χρόνο για μια επανεξέταση μετά από μια πορεία θεραπείας για τη φυματίωση. Μερικές φορές το αποτέλεσμα της δοκιμής είναι ψευδώς θετικό. Αυτό συμβαίνει λόγω βακτηριακής μετάλλαξης.

Όταν απαιτείται PCR

Η PCR για πνευμονική φυματίωση δεν έχει αντενδείξεις και είναι απόλυτα ασφαλής. Επομένως, υπάρχουν ορισμένες καταστάσεις και ασθένειες όταν αυτή είναι η μόνη δυνατότητα έρευνας.

Αυτά περιλαμβάνουν:

• εγκυμοσύνη ·
• επαφή με έναν φυματίον ασθενή.
• δυσκολίες στον προσδιορισμό της διάγνωσης της πνευμονικής νόσου.
• εξέταση πριν από τη χειρουργική επέμβαση
• αλλεργική αντίδραση.
• HIV λοίμωξη;
• νεαρή ηλικία.

Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε τη μέθοδο της PCR στην κατεύθυνση που εκδίδεται στη φλεβιολογία, καθώς και έναν παιδίατρο, έναν γιατρό ή έναν πνευμονολόγο.

Τι μπορεί να αντικαταστήσει την διάγνωση της φυματίωσης με PCR

Άλλοι τύποι ερευνών δεν έχουν καταστεί παρωχημένοι, αλλά εξακολουθούν να χρησιμοποιούνται. Χρησιμοποιούνται σε περιπτώσεις όπου δεν είναι δυνατή η διεξαγωγή PCR για φυματίωση. Επιπλέον, η σύγχρονη μέθοδος δεν είναι ιδανική, μερικές φορές οι δείκτες της είναι αμφισβητούμενοι και απαιτούν εκ νέου έλεγχο.

Οι ακόλουθες μέθοδοι συμβάλλουν στον προσδιορισμό της παρουσίας φυματίωσης σε ένα άτομο:

• διάγνωση της φυματίωσης (Mantoux).
• φθοριογραφία.
• δοκιμή βιολογικού υλικού για τη χλωρίδα ·
• ακτινογραφία των πνευμόνων.

Αυτές οι μελέτες είναι δωρεάν και είναι διαθέσιμες σε όλους. Αλλά έχουν τα μειονεκτήματά τους:

• Η δοκιμή φυματίωσης προκαλεί αλλεργίες. Αντενδείκνυται σε δερματικές παθήσεις.
• Οι μελέτες ακτίνων Χ συνοδεύονται από ακτινοβολία, η οποία δεν ισχύει για παιδιά, άτομα με ανοσοανεπάρκεια και έγκυες γυναίκες.
• Οι βακτηριολογικές αναλύσεις χρειάζονται πολύ περισσότερο χρόνο, το αποτέλεσμα μπορεί να διαρκέσει μέχρι ένα μήνα.

Οι εναλλακτικές λύσεις δεν αποτελούν εγγύηση εκατό τοις εκατό ορθών συμπερασμάτων. Συχνά χρησιμοποιούνται για προληπτικούς σκοπούς. Η διάγνωση της φυματίωσης με PCR δίνει τις πιο αξιόπιστες πληροφορίες. Εάν είναι δυνατόν, είναι προτιμότερο να το χρησιμοποιήσετε.

Οι ιδιαιτερότητες της φυματίωσης στα παιδιά και η ανάγκη για PCR

Το παιδί πρέπει να προστατεύεται ιδιαίτερα από τη νόσο - η λοίμωξη από τη φυματίωση μπορεί να προκαλέσει σοβαρή βλάβη στο σώμα με μια μη πλήρως σχηματισμένη ανοσία.

Μετά την είσοδο του ραβδίου του Koch στον οργανισμό των παιδιών, η ανάπτυξη της νόσου περνάει από τα ακόλουθα στάδια:

• Λανθάνουσα. Διαρκεί έως και ένα χρόνο, χωρίς να δώσει συμπτώματα.
• Δηλητηρίαση. Επηρεάζει τη γενική υγεία. Εμφανίζεται αδυναμία, απάθεια, έλλειψη όρεξης, υπνηλία και μειωμένη απόδοση. Συνεχής ελαφρώς αυξημένη θερμοκρασία.
• Η πρωταρχική μορφή της νόσου. Η φυματίωση εντοπίζεται και αποτελεί το επίκεντρο της νόσου. Το παιδί έχει βήχα, δύσπνοια, πονοκέφαλο, πρησμένους λεμφαδένες.
• Βρογχοειδίτιδα από φυματίωση. Τα συμπτώματα είναι ο πόνος στις ωμοπλάτες, ο βήχας με μεταβαλλόμενο ύψος ήχου, συριγμός.

Συνήθως, η φυματίνη εγχέεται για να αναγνωρίσει την λοίμωξη κάτω από το δέρμα ενός παιδιού. Αν αυτό το είδος της ανάλυσης αντενδείκνυται, τότε η PCR για τη φυματίωση αποτελεί απαραίτητη επιλογή για τη διάγνωση. Τα παιδιά συνήθως λαμβάνουν εξέταση αίματος, αλλά τα πτύελα συλλέγονται εάν είναι απαραίτητο. Στην παραμικρή υποψία της παρουσίας φυματίωσης, διεξάγονται επιπρόσθετες μελέτες για να εξασφαλιστεί ένα θετικό αποτέλεσμα και αμέσως να ξεκινήσει η θεραπεία σε πρώιμο στάδιο, αποτρέποντας την ανάπτυξη της νόσου.

Οι σύγχρονες μέθοδοι έρευνας είναι πάντα ταχύτερες και πιο αξιόπιστες. Είναι λυπηρό το γεγονός ότι λόγω του ακριβού εξοπλισμού για την πραγματοποίηση τέτοιων δοκιμών δεν υπάρχει δυνατότητα σε όλα τα ιατρικά ιδρύματα και τις περιοχές. Ποιος τρόπος διεξαγωγής της εξέτασης επιλέγεται συνήθως από το γιατρό, αλλά ο ασθενής έχει το δικαίωμα να επιλέξει. Αν έπρεπε να κάνετε μια δοκιμή PCR, πείτε μας τα σχετικά με τα σχόλια. Εάν το άρθρο ήταν χρήσιμο για εσάς, μοιραστείτε τα με τα κοινωνικά δίκτυα - ίσως θα βοηθήσει τους φίλους σας.

Τι είναι η PCR για τη φυματίωση και πώς να κάνετε μια εξέταση;

Η PCR για τη φυματίωση συνταγογραφείται όταν είναι αδύνατη η διάγνωση ή είναι αδύνατο να διεξαχθούν άλλες μελέτες. Η ανάλυση καθιστά δυνατή την ταυτοποίηση της ράβδου Koch στα πρώτα στάδια και την έναρξη της θεραπείας εγκαίρως.

Περιγραφή της PCR για τη φυματίωση

Ενδείξεις για διάγνωση PCR

Τύποι PCR για φυματίωση

Προετοιμασία για την ανάλυση

Πώς είναι η PCR για τη φυματίωση

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων της έρευνας

Ιδιαιτερότητες της PCR για τη φυματίωση στα παιδιά

Πόσο κοστίζει η PCR για τη φυματίωση;

Σχόλια και κριτικές

Περιγραφή της PCR για τη φυματίωση

Η PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης) για τη φυματίωση είναι μια ακριβής ανάλυση που μπορεί να ανιχνεύσει ένα ραβδί Koch σε λίγες ώρες. Τα διαγνωστικά βασίζονται σε μεθόδους γενετικής μηχανικής. Οι γιατροί απομονώνουν το κύτταρο ϋΝΑ, χρησιμοποιώντας τις γονιδιακο-μοριακές εξετάσεις για τον προσδιορισμό του τύπου των παθογόνων.

Πλεονεκτήματα της μεθόδου

• σας επιτρέπει να εντοπίσετε τον παθογόνο στα πρώτα στάδια, χωρίς την εμφάνιση ορατών συμπτωμάτων.
• η διάγνωση δεν έχει αντενδείξεις και επιτρέπεται στα παιδιά.
• η έρευνα μπορεί να πραγματοποιηθεί λαμβάνοντας τη ελάχιστη ποσότητα υλικού.
• την καθολικότητα της έρευνας των βιοϋλικών.
• Η μελέτη είναι αποτελεσματική για τον προσδιορισμό της υποτροπής της νόσου.

Μειονεκτήματα της μεθόδου

Μαζί με τα πλεονεκτήματα, οι μελέτες PCR έχουν επίσης μειονεκτήματα.

Τα κυριότερα είναι:

1. Η μελέτη δεν είναι παντού που μπορείτε να περάσετε. Δεδομένου ότι ο εξοπλισμός για μια τέτοια διάγνωση είναι ακριβός, εγκαθίσταται σε καταβαλλόμενα εργαστήρια.
2. Η PCR για φυματίωση μπορεί να δώσει θετική ανταπόκριση εάν ανιχνεύσει νεκρά μυκοβακτήρια, για παράδειγμα, μετά τη θεραπεία.
3. Οι μεταλλάξεις των παθογόνων μειώνουν σημαντικά την αποτελεσματικότητα της μεθόδου PCR, επειδή οι κλώνοι DNA δεν είναι σε θέση να συνθέσουν διαδοχικά.
4. Η ανάγκη προσεκτικά επιλογής βιοϋλικών για ανάλυση.

Ενδείξεις για διάγνωση PCR

Αποστολή στην έρευνα για τις ακόλουθες ενδείξεις:

1. Εάν υπήρχε τουλάχιστον μία μόνο επαφή με έναν ασθενή με φυματίωση και είναι δύσκολο να εντοπιστεί η ασθένεια χρησιμοποιώντας τυποποιημένες δοκιμές.
2. Υπάρχουν περιπτώσεις όπου δεν είναι δυνατόν να φέρουμε ένα άτομο για ακτινογραφίες ή άλλες μελέτες. Σε τέτοιες περιπτώσεις, είναι πολύ πιο εύκολο να παραδοθεί ο πτύελος.
3. Η ανάλυση διορίζεται την παραμονή της επερχόμενης επιχείρησης, όταν είναι απαραίτητο να καθοριστεί αν ένα άτομο είναι άρρωστο ή όχι.
4. Εάν ο ασθενής έχει ένα αμφίβολο αποτέλεσμα της αντίδρασης Mantoux.
5. Αναθέστε σε έγκυες γυναίκες και παιδιά την αποφυγή της έκθεσης σε ακτίνες Χ.

Τύποι PCR για φυματίωση

Η επιλογή του βιολογικού υλικού για τον έλεγχο της φυματίωσης θα πρέπει να διορίζεται μεμονωμένα.

Για τη διάγνωση της PCR για φυματίωση μπορούν να ληφθούν εξετάσεις:

Δοκιμή αίματος

Χαρακτηριστικά της εξέτασης αίματος για φυματίωση:

1. Διεξάγεται σε περιπτώσεις όπου άλλα διαγνωστικά δεν είναι κατάλληλα ή αντενδείκνυνται. Για παράδειγμα, για να κάνετε μια σωστή διάγνωση, πρέπει να πάρετε περισσότερες από μία εικόνες ακτίνων Χ. Η υπερβολική έκθεση δεν είναι ασφαλής για το σώμα, επομένως είναι πολύ πιο εύκολο να αφαιρείτε αίμα από έναν ασθενή.
2. Επίσης, ο γιατρός μπορεί να δώσει κατεύθυνση στο αίμα όταν λαμβάνει αμφιλεγόμενα αποτελέσματα μετά από φθοριογραφία.

Ανάλυση σάλιου

1. Η ανάλυση του σάλιου είναι λιγότερο δημοφιλής και ενημερωτική από άλλες μελέτες, αφού η φυματίωση δεν επηρεάζει τους σιελογόνους αδένες. Επομένως, στις περισσότερες περιπτώσεις, το αποτέλεσμα θα είναι αρνητικό.
2. Η μέθοδος στοχεύει στην αναγνώριση πνευμονικών και εξωπνευμονικών μορφών.
3. Εάν το χρώμα του δείγματος δεν αλλάξει κάτω από τη δράση του αντιδραστηρίου, αυτό σημαίνει ότι δεν υπάρχουν παθογόνα. Εάν, ωστόσο, προκύψει υποψία για ασθένεια, τότε πραγματοποιείται ένα πρόσθετο σύνολο αναλύσεων.

Ανάλυση πτυέλων

Η ανάλυση των πτυέλων είναι η πιο ενημερωτική για την ανίχνευση των παθογόνων της φυματίωσης. Δείγματα λαμβάνονται πολλές φορές, κατά κανόνα, τρεις φορές αρκεί. Αυτό εξαλείφει τη δυνατότητα σφαλμάτων στην απόκτηση υλικού κακής ποιότητας.

Εάν ένα άτομο έχει μολυνθεί από φυματίωση, τα πτύελα σε μικρές ποσότητες θα απελευθερωθούν μαζί με τον βήχα. Σε ασθενείς που βρίσκονται σε προχωρημένο στάδιο της νόσου, η βλέννα θα εκκρίνεται με αιματηρές κηλίδες.

Δεν συνιστάται η λήψη πτυέλων για εξέταση εάν ο ασθενής έχει υποψία φυματίωσης των οστών ή του νευρικού συστήματος.

Ανάλυση ούρων

Η ανάλυση ούρων είναι ένας από τους τρόπους ανίχνευσης εξωπνευμονικών μορφών της νόσου: φυματίωση νεφρών και ουροποιητικό σύστημα.

Στην περίπτωση της πνευμονικής μορφής της νόσου, η γενική ανάλυση των ούρων είναι πρακτικά μη ενημερωτική, καθώς δεν παρατηρούνται σαφείς παθολογικές αλλαγές.

Από το βίντεο θα μάθετε ποιος γιατρός κάνει τη διάγνωση της φυματίωσης. Τραβήχτηκε με φυσαλίδες διαύλου. ru.

Προετοιμασία για την ανάλυση

Όταν λαμβάνετε μια εξέταση αίματος, η PCR πρέπει να ακολουθεί ορισμένους κανόνες για να αποκτήσει ένα αξιόπιστο αποτέλεσμα:

• Συνιστάται να κάνετε μια ανάλυση με άδειο στομάχι.
• θα πρέπει να αποκλείει το αλκοόλ την παραμονή της έρευνας ·
• πρέπει να ολοκληρώσετε τη λήψη αντιβιοτικών 15-20 ημέρες πριν την ανάλυση.
• Συνιστάται να αποφεύγετε το κάπνισμα για μία ώρα πριν τη συλλογή του αίματος.

Κατά τη λήψη ενός πτυέρου για εξέταση, συνιστάται επίσης να ακολουθείτε ορισμένους κανόνες:

• το υλικό συλλέγεται το πρωί, ως εκ τούτου, προ-βουρτσίζουν τα δόντια τους και ξεπλύνετε καλά τη στοματική κοιλότητα?
• αν τα πτύελα δεν κινούνται καλά, συνιστάται να παίρνετε έναν αποχρεμπτικό το βράδυ ή να εισπνέετε.
• Είναι απαραίτητο να σταματήσετε να παίρνετε αντιβιοτικά 15 ημέρες πριν την εξέταση.

Για να αποκτήσετε ένα αξιόπιστο αποτέλεσμα της ανάλυσης των ούρων, συνιστάται στον ασθενή να τηρεί τους ακόλουθους κανόνες:

• το υλικό πρέπει να συλλέγεται το πρωί.
• την παραμονή δεν συνιστάται να τρώτε τρόφιμα που μπορούν να αλλάξουν το χρώμα του υγρού (παντζάρια, βατόμουρο και άλλα)?
• Σταματήστε να λαμβάνετε αντιβιοτικά για 15 ημέρες πριν από την εξέταση.

Πώς είναι η PCR για τη φυματίωση

Χαρακτηριστικά της πρόσληψης υλικού:

1. Μια εξέταση αίματος λαμβάνεται από έναν ασθενή το πρωί από μια φλέβα στο εργαστήριο.
2. Για την παροχή πτυέλων στη βλέννα, είναι απαραίτητο να είναι απαραίτητα από τον λάρυγγα και κατά προτίμηση χωρίς μεγάλες ποσότητες σάλιου. Ο ασθενής της πρέπει να φτύσει σε ένα ειδικό αποστειρωμένο δοχείο και στη συνέχεια να παραδοθεί στη μελέτη.
3. Οι γιατροί λαμβάνουν μια απόξεση με ένα ειδικό εργαλείο από το βλεννογόνο του μάγουλο.
4. Τα ούρα νοικιάζονται σε ειδικό δοχείο. Πάρτε το μεσαίο τμήμα του πρωινού.

Η μοριακή γενετική αντίδραση με PCR διεξάγεται χρησιμοποιώντας μια ειδική συσκευή που ονομάζεται ενισχυτής. Για να μελετήσουμε τα απαραίτητα τμήματα DNA, τα οποία ξεκινούν τη σύνθεση μορίων.

Η τεχνική αποτελείται από τέσσερα στάδια:

1. Αρχικά, συλλέγονται τα απαραίτητα βιοϋλικά για έρευνα (αίμα, πτύελα και σάλιο).
2. Στη συνέχεια, το δείγμα θερμαίνεται σε θερμοκρασία μέχρι 98 μοίρες και όχι περισσότερο από δύο λεπτά. Έτσι, καταστρέφεται η πρωτογενής μορφή της DNA γενετικής και σχηματίζονται δύο αλυσίδες.
3. Στη συνέχεια έρχεται η ανόπτηση ή η μείωση της θερμοκρασίας, εξαιτίας της οποίας ο εκκινητής συνδέεται με τον κλώνο του DNA.
4. Το τελευταίο στάδιο ονομάζεται επιμήκυνση. Αυτή είναι η σύνθεση μορίων, η οποία οδηγεί στο τελικό αποτέλεσμα.

Πρέπει να περάσετε 25-30 τέτοιους κύκλους για να πάρετε έναν ορισμένο αριθμό αντιγράφων του DNA των ιών. Οι αιτιολογικοί παράγοντες της ασθένειας καθορίζονται από αυτούς.

Το περιεχόμενο πληροφοριών και η αξιοπιστία της διάγνωσης PCR είναι 100%.

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων της έρευνας

Ο χρόνος παραγωγής της ανάλυσης είναι περίπου 5-6 ώρες.

Η διάγνωση με τη μέθοδο PCR δίνει δύο παραλλαγές των αποτελεσμάτων:

1. Εντοπίστηκε. Στο υλικό που ερευνήθηκε, ανιχνεύθηκε το DNA του φυματιώδους παράγοντα. Η πιθανότητα μόλυνσης είναι 97%. Οι ασθενείς αυτοί αποστέλλονται γρήγορα σε ιατρείο φυματίωσης, όπου θα γίνει θεραπεία.
2. Δεν ανιχνεύθηκε. Μια αρνητική απάντηση δείχνει την απουσία του αιτιολογικού παράγοντα.

Εάν το αποτέλεσμα είναι θετικό, ο γιατρός εκτελεί μια λεπτομερή αποκωδικοποίηση, η οποία καθορίζει το στάδιο και την εστίαση της νόσου.

Φωτογραφική συλλογή

Ιδιαιτερότητες της PCR για τη φυματίωση στα παιδιά

Η PCR συνταγογραφείται εάν το αποτέλεσμα μιας δοκιμής Mantoux είναι αβέβαιο ή με την παραμικρή υποψία μόλυνσης. Η παροχή της διαδικασίας είναι ασφαλής για τα παιδιά.

PCR διάγνωση της φυματίωσης σε παιδιά και ενήλικες: ενδείξεις για

Ο Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας αναγνώρισε πριν από 20 χρόνια ότι ο ρυθμός εξάπλωσης της φυματίωσης ήταν εκτός ελέγχου και έφθασε σε κλίμακα επιδημίας. Έκτοτε, η κατάσταση δεν βελτιώθηκε. Περισσότερα από ένα εκατομμύριο κρούσματα της νόσου διαγιγνώσκονται κάθε χρόνο, εκ των οποίων σχεδόν το ένα τέταρτο είναι θανατηφόρο. Την τελευταία δεκαετία, η συχνότητα εμφάνισης των παιδιών έχει αυξηθεί, οι περισσότερες μορφές της νόσου δεν προσφέρονται για συνήθη θεραπεία με αντιβιοτικά.

Σήμερα, ένα από τα παγκόσμια καθήκοντα για την ιατρική είναι η ανάπτυξη τέτοιων διαγνωστικών μεθόδων που θα επιτρέψουν την ταυτοποίηση της παθολογίας πριν από την εμφάνιση έντονων κλινικών συμπτωμάτων. Ένας από αυτούς είναι η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) για τη φυματίωση, η οποία βοηθά στην ανίχνευση ραβδιών που προκαλούν ασθένεια Koch στο αίμα, στα πτύελα και σε άλλα βιολογικά υγρά.

Διάγνωση της φυματίωσης

Οι εξετάσεις ελέγχου αποσκοπούν στην ανίχνευση ασθενών, φορέων φυματίωσης και πρόληψης της εξάπλωσης της λοίμωξης στην κοινωνία. Για τα παιδιά ηλικίας κάτω των 14 ετών, η δοκιμασία Mantoux χρησιμοποιείται μαζικά. Πρόκειται για μια ανοσολογική δοκιμασία στην οποία μια δόση φυματίνης εγχέεται υποδόρια - ένα σύνθετο μείγμα του γενετικού υλικού πολλών τύπων μυκοβακτηριδίων. Η εμφάνιση μιας έντονης αντίδρασης υποδεικνύει μια ενεργό μολυσματική διαδικασία.

Για προληπτική εξέταση σε ενήλικες που χρησιμοποιούν φθορίωση ή ακτίνες Χ. Αυτές οι μέθοδοι συμβάλλουν στην απεικόνιση των παθολογικών βλαβών στον πνευμονικό ιστό. Παρόλα αυτά, προκαλεί δυσκολίες στη διαφοροποίηση της φυματίωσης από μια άλλη οργανική παθολογία (κακοήθη και καλοήθη νεοπλάσματα, φλεγμονώδεις διεργασίες, παρασιτικές επιδρομές, επαγγελματική πνευμονική βλάβη).

Για να αποσαφηνιστεί η δομή και το μέγεθος της παθολογικής εστίασης, ενδέχεται να χρειαστούν επιπρόσθετες οργανικές μελέτες:

• στοχευμένη ακτινογραφία.
• υπολογιστική τομογραφία.
• απεικόνιση μαγνητικού συντονισμού.

Μέθοδοι διάγνωσης της φυματίωσης

Στην περίπτωση αμφιλεγόμενων αποτελεσμάτων και για το διορισμό κατάλληλης θεραπείας, υπάρχει ανάγκη για ακριβέστερες διαγνωστικές μεθόδους που καθιστούν δυνατή την απομόνωση του παθογόνου παράγοντα. Μικροσκοπική και βακτηριολογική εξέταση των πτυέλων χρησιμοποιείται για την επιβεβαίωση των πνευμονικών μορφών φυματίωσης για μεγάλο χρονικό διάστημα.

Τα τελευταία χρόνια, η συχνότητα εμφάνισης μυκοβακτηριδίου διαφόρων οργάνων και συστημάτων - νεφρών, οστών, εντέρων, δέρματος - έχει γίνει συχνότερη. Για τον εντοπισμό αυτών των μορφών φυματίωσης, υπερηχογραφικών εξετάσεων, καλλιέργειας ούρων και περιττωμάτων, μπορούν να χρησιμοποιηθούν ενδοσκοπικές εξετάσεις.

Η διάγνωση της ΡΒΚ για τη φυματίωση θα βοηθήσει στην επιβεβαίωση της παρουσίας ραβδιών Koch στο αίμα, καθώς και της ευαισθησίας της σε ορισμένα φάρμακα. Αυτή είναι μια πολύ αποτελεσματική μέθοδος που βασίζεται στην ανίχνευση του βακτηριακού γενετικού υλικού σε διάφορα βιολογικά υγρά.

Ειδικότητα και ενδείξεις

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης είναι μια πολύ ευαίσθητη μικροβιολογική διαγνωστική μέθοδος, η οποία βασίζεται στις αρχές της γενετικής μηχανικής. Για να επιβεβαιωθεί η παρουσία ενός παθογόνου παράγοντα σε ένα βιολογικό υλικό, αρκεί να ανιχνευθεί ένα μοναδικό θραύσμα νουκλεϊκού οξέος γι 'αυτό. Η PCR για τη φυματίωση μπορεί να ανιχνεύει τα βακτήρια στο αίμα, τα πτύελα, τα ούρα.

Προς το παρόν, ανέπτυξε διάφορες μεθόδους ανάλυσης. Τα πιο δημοφιλή μεταξύ τους είναι τα εξής:

• PCR σε πραγματικό χρόνο.
• τεχνολογία μικρορευστών ·
• την αλληλούχιση και την πυροεπιλογή.

PCR σε πραγματικό χρόνο

Τα εργαστήρια χρησιμοποιούν συχνότερα αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο, καθώς μειώνουν τον αριθμό των ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων και η ίδια η διαδικασία ανάλυσης διαρκεί λίγο χρόνο.

Δεδομένου του μεγάλου αριθμού κρυφών μορφών της νόσου και της αναποτελεσματικότητας των τυποποιημένων διαγνωστικών μεθόδων, η PCR χρησιμοποιείται όλο και περισσότερο. Ο σκοπός αυτής της ανάλυσης παρουσιάζεται σε:

• τον εντοπισμό ύποπτων περιοχών στην ακτινογραφία.
• αμφισβητήσιμα αποτελέσματα δοκιμασίας φυματίνης.
• η αδυναμία διεξαγωγής μικροσκοπικής και βακτηριολογικής ανάλυσης πτύων σε άτομα σε σοβαρή κατάσταση ·
• διεξαγωγή χειρουργικών επεμβάσεων όταν είναι απαραίτητο να εξασφαλιστεί γρήγορα ότι δεν υπάρχει μόλυνση.
• το απαράδεκτο της χρήσης φθορογραφίας, ακτίνων Χ ή υπολογιστικής τομογραφίας (για παράδειγμα, σε εγκύους και θηλασμού, σε περιπτώσεις υπερβολικής έκθεσης στην ακτινοβολία) ·
• υποψία εξωπνευμονικής φυματίωσης (συνιστάται να χρησιμοποιείται όχι μόνο το αίμα αλλά και το φλέγμα).

Η διάγνωση της φυματίωσης από την PCR έχει αποδειχθεί στην εξέταση των παιδιών, λόγω της έλλειψης πρόσθετης έκθεσης και των ταχέων αποτελεσμάτων.

Διαδικασία προετοιμασίας και ανάλυσης

Δεν απαιτείται ειδική προετοιμασία για PCR αίματος. Ωστόσο, για να αποφευχθούν οι επιπλοκές της δειγματοληψίας αίματος και για να ληφθεί υλικό υψηλής ποιότητας, πρέπει να ακολουθούνται οι ακόλουθοι γενικοί κανόνες:

• η ανάλυση πρέπει να λαμβάνεται το πρωί όχι νωρίτερα από 2 ώρες μετά το ξύπνημα.
• Πρέπει να περιορίζει την πρόσληψη λιπαρών και τηγανισμένων τροφών την ημέρα πριν από τη δειγματοληψία αίματος.
• αποφεύγετε να τρώτε, τσάι και καφέ για 8-9 ώρες, επιτρέπεται να πίνετε καθαρό νερό,
• Μην καπνίζετε για τουλάχιστον 3-4 ώρες.

Σε περίπτωση μόνιμης φαρμακευτικής αγωγής (ορμόνες, αντιπηκτικά, αντιφλεγμονώδη φάρμακα, αντιβιοτικά, αραιωτικά αίματος), πρέπει να ενημερώσετε σχετικά τον εργαστηριακό βοηθό.

Κατά την παράδοση των πτυέλων, θα πρέπει να βουρτσίζετε τα δόντια σας καλά και να ξεπλένετε το στόμα σας αρκετές φορές. Συλλέξτε υλικό σε αποστειρωμένο δοχείο. Για καλύτερα αποτελέσματα, μπορεί να ληφθεί αποχρεμπτικό ή βλεννολυτικό μέσο το βράδυ.

Η ίδια η διάγνωση αποτελείται από διάφορα στάδια.

Υλικό φράχτη. Μπορεί να πραγματοποιηθεί στο εργαστήριο και εξ αποστάσεως. Ορισμένοι τύποι υλικού που ο ασθενής συλλέγει ανεξάρτητα (ούρα, φλέγμα).

Η καταστροφή της δομής των νουκλεϊνικών οξέων (μετουσίωση μορίων DNA και RNA). Για να γίνει αυτό, το υλικό δοκιμής θερμαίνεται σε θερμοκρασία 98 μοίρες και διατηρείται για αρκετά λεπτά. Ως αποτέλεσμα, η διπλή έλικα ξετυλίγεται, σχηματίζονται μονόκλωνα μόρια.

Ανόπτηση Μετά την προσθήκη ενός εκκινητή (μικρού τμήματος νουκλεϊκού οξέος), η θερμοκρασία μειώνεται κατά αρκετούς βαθμούς, ενεργοποιείται η πολυμεράση.

Αναγνώριση. Η θερμοκρασία φτάνει στο βέλτιστο επίπεδο, η δραστικότητα του ενζύμου φτάνει στο μέγιστο και η δεύτερη αλυσίδα ολοκληρώνεται σύμφωνα με τον κανόνα της συμπληρωματικότητας Chargaff.

Για να ολοκληρωθεί η μελέτη, είναι απαραίτητο να συντεθεί ο απαιτούμενος αριθμός μορίων DNA - περίπου 50 κύκλοι της παραπάνω αντίδρασης. Χρειάζονται περίπου 2-3 ​​ώρες. Ένα θετικό αποτέλεσμα της αντίδρασης δεν δείχνει πάντα το ενεργό στάδιο της νόσου, αλλά είναι ένας δείκτης της παρουσίας ενός μικροοργανισμού στο σώμα.

Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα της μεθόδου

Σε σύγκριση με άλλες μικροβιολογικές μεθόδους, η PCR δεν απαιτεί πολύ χρόνο για να ανιχνεύσει το Mycobacterium tuberculosis χρησιμοποιώντας PCR, το αποτέλεσμα μπορεί να ληφθεί την ημέρα της δοκιμής.

Ένα άλλο πλεονέκτημα είναι η υψηλή εξειδίκευση της ανάλυσης, η οποία καθιστά δυνατή την ανίχνευση της παρουσίας του παθογόνου παράγοντα με ακρίβεια 90-95% σε σχεδόν οποιοδήποτε βιολογικό υλικό (αίμα, ούρα, κόπρανα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, πτύελα, έκπλυση βρόγχων).

Ωστόσο, υπάρχουν πολλά μειονεκτήματα της μεθόδου:

• ένα μάλλον υψηλό ποσοστό ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων (έως και 15%), που συνδέεται με την ανίχνευση μη ζωντανών μικροοργανισμών.
• σε ορισμένες περιπτώσεις, μπορείτε να παραλείψετε το γεγονός της ασθένειας, καθώς το Mycobacterium tuberculosis συχνά υποβάλλεται σε μεταλλάξεις και αλλαγές γενετικού υλικού του.
• χαμηλή αποτελεσματικότητα στην εξέταση ατόμων με ανοσοανεπάρκεια ·
• το υψηλό κόστος της έρευνας, την ανάγκη για ακριβό εξοπλισμό και αντιδραστήρια.

Τι μπορεί να αντικατασταθεί;

Δεδομένης της ποικιλίας μορφών μόλυνσης από φυματίωση, για πιο ακριβή διάγνωση και επιλογή θεραπείας είναι απαραίτητο να συνδυαστούν διάφορες διαγνωστικές μελέτες:

Υποχρεωτική ανάλυση για παιδιά είναι η δοκιμή Mantoux. Εάν η εισαγωγή της φυματίνης (γενετικό υλικό των μυκοβακτηριδίων) εμφανίζει έντονη αντίδραση, μπορεί να θεωρηθεί λοίμωξη με βακίλο φυματίωσης.

Οι μέθοδοι ακτίνων Χ μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την απεικόνιση της παθολογικής εστίασης. Στη διάγνωση της εξωπνευμονικής φυματίωσης, χρησιμοποιούνται ενδοσκοπικές μέθοδοι με ταυτόχρονη βιοψία:

• η βρογχοσκόπηση βοηθά στην αναγνώριση των βλαβών του λάρυγγα, της τραχείας, των βρόγχων.
• κολονοσκόπηση - έντερα.
• κυστεουρεθροσκόπηση - όργανα του ουροποιητικού συστήματος.
• Υστεροσκόπηση - γυναικεία γεννητικά όργανα. Αυτές οι μέθοδοι δεν είναι συγκεκριμένες, για την ακριβή διάγνωση, πρέπει να εντοπιστεί ο παθογόνος παράγοντας.

Οι γενικές κλινικές δοκιμές θα βοηθήσουν στον πιο συγκεκριμένο προσδιορισμό της κατάστασης του σώματος. Απαιτείται πλήρης αιμοληψία με τύπο λευκοκυττάρων.

Η αύξηση του αριθμού των ουδετερόφιλων με μειωμένο επίπεδο λεμφοκυττάρων και η αύξηση του ποσοστού καθίζησης των ερυθροκυττάρων (ESR) υποδεικνύει μια ενεργή φλεγμονώδη διαδικασία βακτηριακής αιτιολογίας. Αποκλείστε τη βλάβη στα όργανα του ουροποιητικού συστήματος χρησιμοποιώντας μια γενική ανάλυση ούρων και καλλιέργεια για αποστείρωση.

Η PCR είναι σήμερα διαθέσιμη στα περισσότερα ιδιωτικά εργαστήρια. Αυτό απαιτεί όχι μόνο υψηλά ειδικευμένους ειδικούς, αλλά και ακριβό εξοπλισμό, μεγάλο αριθμό αντιδραστηρίων. Ως εκ τούτου, η χρήση αυτής της μεθόδου είναι περιορισμένη παρά την υψηλή ακρίβεια και την ειδικότητά της.

Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) για τη φυματίωση

Η φυματίωση είναι μια από τις πιο επικίνδυνες ασθένειες από τις οποίες πάσχει η ανθρωπότητα εδώ και εκατοντάδες χρόνια. Παρόλο που οι επιστήμονες μπόρεσαν να εντοπίσουν τον αιτιολογικό παράγοντα και να εφεύρουν αντιβιοτικά για να το εξαλείψουν, η θεραπεία δεν είναι πάντα επιτυχημένη. Ο κύριος λόγος είναι μια μακρά περίοδος λανθάνουσας ή λανθάνουσας μορφής της ασθένειας, η οποία μπορεί να διαρκέσει αρκετά χρόνια. Η καθυστερημένη διάγνωση μειώνει σημαντικά τις πιθανότητες για αποκατάσταση και πλήρη ζωή του ασθενούς.

Τι είναι το PCR;

Για την ανίχνευση του mycobacterium tuberculosis στο σώμα για πάνω από εκατό χρόνια, η δοκιμή Mantoux έχει χρησιμοποιηθεί με επιτυχία. Άλλες μέθοδοι έχουν αποδειχθεί καλά: βακτηριολογική καλλιέργεια σε τεχνητό μέσο, ​​μικροσκοπία επίχρωσης, ELISA. Ωστόσο, ένας μεγάλος αριθμός επιπλοκών και ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων, καθώς και η διάρκεια ορισμένων μεθόδων, απαιτούσαν την εισαγωγή νέων τεχνολογιών στη διαγνωστική μεθοδολογία. Ένα τεράστιο επίτευγμα στον τομέα της μικροβιολογίας ήταν η εμφάνιση της ανάλυσης PCR για τη φυματίωση. Για αρκετές δεκαετίες, έχει δείξει την αποτελεσματικότητά του και χρησιμοποιείται ευρέως για τη διαφορική διάγνωση διαφόρων μορφών φυματίωσης.

PCR ανάλυση για φυματίωση ή αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης - μία μέθοδος για την ανίχνευση του βακτηριακού DNA, ή θραυσμάτων αυτού, με βάση την αύξηση των μορίων νουκλεϊκού οξέος από το ένζυμο DNA πολυμεράση. Για ένα θετικό αποτέλεσμα, αρκεί μόνο ένα μόριο του παθογόνου ϋΝΑ · επομένως, αυτή η μέθοδος θεωρείται εξαιρετικά ευαίσθητη. PRTS Η διάγνωση της φυματίωσης είναι πιο αποτελεσματική από τη σπορά των μυκοβακτηριδίων σε ένα τεχνητό περιβάλλον, δεδομένου ότι σε αντίθεση με τη μέθοδο της καλλιέργειας επιτρέπει να γίνεται διάκριση μεταξύ άγρια ​​και εμβολίου στελέχη BCG εμβολιαστεί. Αυτό αποτρέπει τα ψευδώς θετικά και καθιστά τη διάγνωση πιο ακριβή.

Οφέλη από την PCR

PCR διάγνωση της φυματίωσης μπορεί να ανιχνεύσει Koch ραβδί σε οποιοδήποτε βιολογικό μέσο οργανισμό με τον προσδιορισμό της ποσοτικής σύνθεσης τους, ακόμη και κατά το αρχικό στάδιο της ασθένειας, όταν μυκοβακτηρίδια βρίσκονται στην «αδρανοποίησης». Η διάγνωση της νόσου στη λανθάνουσα φάση επιτρέπει χρόνο για να ξεκινήσει προληπτική θεραπεία για την πρόληψη της ανάπτυξης των πνευμόνων εστίες της φλεγμονής και την εμφάνιση των επιπλοκών σε άλλα όργανα και συστήματα. Επιπλέον, η δοκιμή PCR για τη φυματίωση έχει αρκετά πλεονεκτήματα:

• υψηλή ειδικότητα - 90-100%.
• υψηλή ταχύτητα - από 4 ώρες έως 2 ημέρες.
• υψηλή ευαισθησία, ιδιαίτερα στην ανοσοανεπάρκεια.
• διαφορική διάγνωση.

Το κύριο πλεονέκτημα της μεθόδου είναι ότι η διάγνωση της φυματίωσης σε παιδιά από το CRC καθιστά δυνατή τη διάκριση της διαδεδομένης μορφής της ασθένειας από την περιορισμένη εστία, ακόμη και με αρνητικά αποτελέσματα από άλλες δοκιμές. Η διαφορική εξέταση σας επιτρέπει να επιλέξετε το σωστό θεραπευτικό σχήμα και να αυξήσετε την αποτελεσματικότητα της θεραπείας.

Η υψηλή εξειδίκευση της ανάλυσης επιτυγχάνεται με την εξάλειψη των διασταυρούμενων αντιδράσεων με άλλα μόρια νουκλεϊκού οξέος και η υψηλή ευαισθησία καθιστά δυνατή την ανίχνευση μυκοβακτηρίων ακόμη και σε μικρό όγκο του συλλεγόμενου υλικού. Η μέθοδος PCR των πτυέλων για φυματίωση έχει τη μεγαλύτερη αξιοπιστία, η ειδικότητά της φτάνει το 100% σε σύγκριση με τη μελέτη άλλων βιολογικών υλικών.

Ένας ειδικός μηχανισμός PCR παρέχει άφθονες ευκαιρίες για την ανίχνευση των κολλητών Koch σε ανοσοκατεσταλμένους ασθενείς. Σύμφωνα με τη μέθοδο ανάλυσης, η αντίδραση ανιχνεύει αντιγόνα, επομένως δεν έχει σημασία αν το σώμα παράγει αντισώματα στο παθογόνο ή όχι. Έτσι, είναι δυνατό να διαγνωσθούν εξωπνευμονικές μορφές της νόσου και προχωρημένες περιπτώσεις σε ασθενείς με ανακρίβειες στο ανοσοποιητικό σύστημα, κάτι που δεν είναι δυνατό με άλλες μεθόδους.

Μειονεκτήματα της μεθόδου

Παρά τα πολλά πλεονεκτήματα και την υψηλή ευαισθησία της ανάλυσης, η PCR για τη φυματίωση μπορεί να δώσει ψευδή αρνητικά αποτελέσματα. Δεδομένου ότι μια πολύ μικρή ποσότητα βιομάζας λαμβάνεται για διάγνωση, δεν αποκλείεται το γεγονός ότι το παθογόνο "κρύβεται" σε κύτταρο ή φλεγμονώδη εστίαση και δεν απελευθερώνεται έξω.

Η ευαισθησία αυτής της μεθόδου στα παιδιά είναι 25-80%. Για παράδειγμα, σε μια τυχαιοποιημένη μελέτη σε μια ομάδα ασθενών με κλινικά αποδεδειγμένη διάγνωση, μια εξέταση αίματος PCR για φυματίωση έδωσε θετικό αποτέλεσμα μόνο στο 50% των ασθενών. Από την άποψη αυτή, όταν δοκιμάζεται ένα παιδί για παθογόνα μυκοβακτήρια, δεν είναι δυνατόν να αντικατασταθεί μία διαγνωστική μέθοδος με άλλη. Προκειμένου να εξακριβωθεί πλήρως η απουσία λοίμωξης, είναι απαραίτητο να διεξαχθεί συνολική μελέτη με διάφορους τρόπους ταυτόχρονα.

Διαδικασία συλλογής

Η κύρια προϋπόθεση για την αξιοπιστία της διάγνωσης PCR είναι η συμμόρφωση με τους κανόνες συλλογής βιολογικών υγρών για ανάλυση. Το μολυσμένο ή ακατάλληλα συλλεγμένο υλικό μπορεί να προκαλέσει λανθασμένα αποτελέσματα. Η πιο κοινή είναι η πτύελα, αίμα ή ούρα, αλλά είναι δυνατόν να ληφθούν δείγματα των γαστρικών περιεχομένων για τη διαφορική διάγνωση ενός βαθύτερου, αρθρικό υγρό, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, βρογχικό ρευστό έκπλυσης, σπέρμα, προστάτη εκκρίσεις.

Η PCR για ούρηση για φυματίωση λαμβάνεται το πρωί μετά την εξωτερική υγιεινή των γεννητικών οργάνων με ούρηση σε αποστειρωμένο δοχείο. Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας είναι σημαντικό να μην αγγίζετε τα εσωτερικά τοιχώματα του περιέκτη για να αποτρέψετε την είσοδο μικροοργανισμών τρίτων. Οι γυναίκες που ζουν μια κανονική σεξουαλική ζωή θα πρέπει σίγουρα να βάλουν ένα ταμπόν στον κόλπο για να αποφύγουν την έκλυση τρίτων.

Μια εξέταση αίματος λαμβάνεται το πρωί με άδειο στομάχι και η PCR για πτύελα για φυματίωση μπορεί να γίνει οποιαδήποτε στιγμή της ημέρας με υποχρεωτική προηγούμενη στοματική υγιεινή. Αυτό είναι απαραίτητο για την αφαίρεση υπολειμμάτων τροφίμων που μπορεί να εισέλθουν στο δοχείο. Όταν εκφυλίζονται τα πτύελα, είναι σημαντικό να αποφευχθεί η εισχώρηση του σάλιου και της βλέννας από το ρινοφάρυγγα στο δοχείο, γεγονός που μπορεί να προκαλέσει παραμόρφωση των δεδομένων ανάλυσης.

Η μελέτη των περιεχομένων του στομάχου πραγματοποιείται στο νοσοκομείο νωρίς το πρωί, ενώ το πτύελο που καταπίνει ολονυκτίς βρίσκεται στο στομάχι. Για την ανίχνευση του mycobacterium tuberculosis, αυτή η μέθοδος καθιστά τριπλάσια σπορά, η οποία πιθανότατα καθιστά δυνατή την απομόνωση ενός βακίλου Koch.

Αποκωδικοποίηση αποτελεσμάτων

Η ποιοτική ανάλυση της PCR δίνει 2 τύπους αποτελεσμάτων "ανιχνευθέντων" ή "ανιχνευθέντων". Σημαίνουν θετική και αρνητική ετυμηγορία, αντίστοιχα. Η απάντηση "ανίχνευση" σημαίνει ότι το DNA του μολυσματικού παράγοντα υπάρχει στο δείγμα δοκιμής και με 97% πιθανότητα το σώμα να μολυνθεί από φυματίωση. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα δείχνει την απουσία ϋΝΑ κολλά Koch στη λήψη δειγμάτων βιολογικού υλικού, και δίνει 97% πιθανότητα ότι το σώμα δεν έχει πολλά των μυκοβακτηριδίων, και 60% ότι το άτομο δεν έχει μολυνθεί.

Η μεγαλύτερη ειδικότητα για τη διάγνωση της φυματίωσης είναι η εξέταση αίματος και τα πτύελα. Με θετικό αποτέλεσμα, δείχνουν λοίμωξη του σώματος, η οποία απαιτεί επείγοντα θεραπευτικά μέτρα. Μελέτες άλλων βιοϋλικών μπορεί να δείχνουν όχι την πορεία της νόσου, αλλά μόνο την παρουσία ξένων βακτηριδίων. Αυτό συμβαίνει όταν ένα άτομο είναι φορέας της ασθένειας, αλλά δεν διαδίδει τη μόλυνση στο περιβάλλον και δεν μολύνει τους υγιείς ανθρώπους.

Η ποσοτική ανάλυση PCR εκτελείται λιγότερο συχνά και ο θεράπων ιατρός ασχολείται με την αποκωδικοποίηση των αποτελεσμάτων του. Οι δείκτες της έρευνας χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό της δραστηριότητας της νόσου και του βαθμού βλάβης του σώματος. Με βάση τα δεδομένα που ελήφθησαν, ένας ειδικός μπορεί να καθορίσει την αποτελεσματικότητα της θεραπείας και, εάν είναι απαραίτητο, να προσαρμόσει το θεραπευτικό σχήμα.

Η φυματίωση υπήρξε και παραμένει ένα από τα σοβαρότερα προβλήματα για την υγεία ολόκληρης της ανθρωπότητας. Οι σύγχρονες διαγνωστικές μέθοδοι μπορούν να ανιχνεύσουν την ασθένεια σε πρώιμο στάδιο προκειμένου να ξεκινήσει η θεραπεία έγκαιρα. Δοκιμασία φυματίωσης, μικροσκοπία επιφανειών, καλλιέργεια βακτηρίων σε τεχνητά θρεπτικά μέσα έχουν αποδειχθεί στον τομέα της εργαστηριακής διάγνωσης της φυματίωσης. Ωστόσο, η μακρά αναμονή για τα αποτελέσματα και η αυξημένη συχνότητα των ψευδώς θετικών αναγνώσεων τους κατέστησαν απηρχαιωμένες και έφεραν στο προσκήνιο πιο προηγμένες τεχνολογίες. Η ανάλυση PCR είναι μια εξαιρετικά ειδική και εξαιρετικά αποτελεσματική μέθοδος διάγνωσης της φυματίωσης. Τα αποτελέσματά του είναι τα πιο αξιόπιστα μεταξύ όλων των προτεινόμενων εργαστηριακών μεθόδων για την ανίχνευση ραβδιών Koch. Επιτρέπει όχι μόνο την τελική ετυμηγορία, αλλά και τη διεξαγωγή της απαραίτητης διαφορικής διάγνωσης.

Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης για φυματίωση

Η ανάλυση PCR για τη φυματίωση σάς επιτρέπει να εντοπίσετε την ασθένεια σε οποιοδήποτε στάδιο ανάπτυξης με έναν ελάχιστο αριθμό μυκοβακτηρίων ή ακόμα και αν υπάρχουν θραύσματα στο ανθρώπινο σώμα από το DNA παθογόνου.

Τι είναι το PCR;

Η PCR εμφανίστηκε σχετικά πρόσφατα. Το 1983, η μέθοδος δημιουργήθηκε από τον αμερικανικό μικροβιολόγο Carey Mullis, για τον οποίο έλαβε το βραβείο Νόμπελ. Η βάση της PCR είναι ο επαναλαμβανόμενος διπλασιασμός μιας συγκεκριμένης περιοχής DNA με τη βοήθεια ενζύμων in vitro. Ως αποτέλεσμα, το DNA παθογόνου είναι μοντέρνο για να απεικονίσει ακόμη και παρουσία του σε ελάχιστες ποσότητες (ίχνη παρουσίας). Αυτό είναι το χρυσό πρότυπο της ειδικότητας.

Η διαδικασία της PCR για τη φυματίωση (διαδικασία αλυσίδας πολυμερούς) είναι μια διαγνωστική διαδικασία για την ανίχνευση μιας μόλυνσης με τη χρήση γενετικής μηχανικής. Αυτή η μέθοδος έρευνας χρησιμοποιείται σε μικροβιολογικά, ιολογικά και ανοσολογικά ιατρικά εργαστήρια σε αμφίβολες και πρακτικά μη προληπτικές από πλευράς διαγνωστικών περιπτώσεων.

Τι χρειάζεται για την ανάλυση;

Η ανάλυση απαιτεί 3 συνιστώσες:

• Δείγμα DNA.
• Νουκλεοτιδικές ενώσεις.
• Ενζυμα πολυμεράσης.

Η ανάλυση υποβάλλεται στο εργαστήριο σύμφωνα με τις οδηγίες του θεράποντος ιατρού.

Ποια είναι η βάση της μεθόδου;

Στην αρχή της έρευνας, ένα μικροβιακό DNA τμήμα εξάγεται από το βιορευστό.

Η PCR προσδιορίζει τον τύπο του παθογόνου, 2-3 ώρες μετά τη δοκιμή. Ωστόσο, δεν χρειάζεται να απομονωθεί από βιολογικό υλικό ή να αναπτυχθεί για μεγάλο χρονικό διάστημα στο εργαστήριο. Το κυριότερο είναι ότι το δείγμα περιείχε ένα κομμάτι μολυσμένου DNA. Κατά την ανάλυση της φυματίωσης in vitro δημιουργείται τεχνητή σύνθεση λοίμωξης από ριβονουκλεϊνικό οξύ. Λόγω της ταχείας αντίδρασης μετά από μερικές ώρες, μπορείτε να πάρετε ένα αξιόπιστο αποτέλεσμα.

Στάδια διάγνωσης

Η Φυματίωση PCR είναι μια απλή διαγνωστική μέθοδος που σας επιτρέπει να πάρετε μια απάντηση σε σύντομο χρονικό διάστημα. Για τον προσδιορισμό του tbc, λαμβάνεται το βιολογικό υλικό ενός μολυσμένου ατόμου (αίμα, πτύελα, βιολογικό υγρό).

Η διάγνωση πραγματοποιείται σε τρία κύρια στάδια:

• Μετά τη δειγματοληψία στο εργαστήριο, καταστρέφεται η πρωτογενής μορφή του DNA. Σε μία θερμοκρασία 980 μοιρών, 1,5 αλυσίδες διαχωρίζονται σε 1,5 λεπτά.
• Στο επόμενο στάδιο, η ανόπτηση γίνεται, η θερμοκρασία του αέρα μειώνεται από δύο ζεύγη, το DNA συνδέεται με το αστάρι.
• Το τελευταίο στάδιο της μελέτης ονομάζεται επιμήκυνση. Είναι η βιοσύνθεση των μορίων.

Για τον εντοπισμό του επιθυμητού DNA με ένα σωματίδιο μόλυνσης, η διάγνωση μπορεί να γίνει 20-25 φορές.

Είναι απαραίτητο να γίνει PCR για φυματίωση;

Η ανάλυση PCR για τη φυματίωση πραγματοποιείται πάντα όταν υπάρχει ανάγκη για αυτή, περιλαμβάνεται στο ποιοτικό πρότυπο της εξέτασης ενός ασθενούς για φυματίωση. Για να το κάνετε, χρειάζεστε μόνο μια παραπομπή από το γιατρό σας. Τις περισσότερες φορές, στην πολυκλινική, χρησιμοποιούνται άλλες διαγνωστικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της φυματίωσης.

Αυτά περιλαμβάνουν:

• Αμφισβήτηση και συλλογή αναμνησίων.
• Ιατρική εξέταση.
• Δοκιμή φυματίνης Mantoux.
• Ακτίνων Χ ή φθοριογραφίας.
• Υπερηχογράφημα.
• Μικροσκοπική διάγνωση δείγματος πτυέλων.

Παρά τον μεγάλο αριθμό διαγνωστικών εργαλείων, ο αριθμός των μολυσμένων ετησίως αυξάνεται. Επιπλέον, η παθολογία έχει αποκτήσει ορισμένα χαρακτηριστικά: τη σοβαρότητα της διαδικασίας, την αύξηση των θανατηφόρων αποτελεσμάτων και την ανοσία του παθογόνου για τα ναρκωτικά.

Οι γιατροί δεν συνιστούν την εγκατάλειψη της ετήσιας επιθεώρησης και του εμβολιασμού, καθώς αυτό αυξάνει τον κίνδυνο μόλυνσης. Η ανάλυση PCR έχει πολλά πλεονεκτήματα και ως εκ τούτου θεωρείται η πλέον ακριβής και ενημερωτική όλων των μεθοδικών μεθόδων για την ανίχνευση της tbc και χρησιμοποιείται ευρέως στις σύγχρονες κλινικές.

Ποια είναι η αξία της μεθόδου;

Η διαδικασία αλυσίδας πολυμερούς χρησιμοποιείται συχνά σε συνδυασμό με πρόσθετες μεθόδους για την ανίχνευση λοίμωξης από φυματίωση. Η αξία της μεθόδου έχει ως εξής:

• Σύντομος χρόνος. Ήδη μετά από 2-3 ώρες μετά την αιμοδοσία, είναι δυνατόν να ανιχνευθεί η παρουσία μιας μόλυνσης σε βιολογικό υλικό. Αυτό είναι απαραίτητο σε περιπτώσεις όπου υπάρχει ζήτημα ζωής και θανάτου και πρέπει να προσδιορίσετε την ακριβή διάγνωση για χειρουργική επέμβαση.
• Ορισμένες διαγνωστικές μέθοδοι έχουν τις δικές τους αντενδείξεις και δεν παρουσιάζουν πάντα μια πλήρη εικόνα της διάγνωσης. Με τη βοήθεια της PCR, ο παθογόνος παράγοντας ανιχνεύεται αμέσως και είναι δυνατή η διεξαγωγή της διαδικασίας για άτομα όλων των ηλικιών.
• Ως δείγμα, μπορείτε να πάρετε οποιοδήποτε μολυσμένο βιολογικό υλικό. Για τον προσδιορισμό των πνευμονικών μορφών της νόσου, λαμβάνονται ούρα ή σάλιο. Ένα δείγμα αίματος βοηθά στον εντοπισμό όλων των μορφών παθολογίας. Το νωτιαίο υγρό είναι απαραίτητο για τον προσδιορισμό της φυματιώδους μηνιγγίτιδας.
• Μέθοδος ασφαλείας. Για την έρευνα απαιτείται μόνο το βιολογικό υλικό του ασθενούς. Ως εκ τούτου, είναι μια απόλυτα ασφαλής και αβλαβής διαδικασία τόσο για παιδιά όσο και για ενήλικες, σε αντίθεση με τη φθορογραφία, η οποία γίνεται από την ηλικία των 18 ετών, και το Mantoux, το οποίο προκαλεί αρνητικές αντιδράσεις στο σώμα.
• Εξαιρετικά ευαίσθητη δοκιμή. Καθιστά δυνατή την ταυτοποίηση της παθολογίας ακόμα και στα αρχικά στάδια ανάπτυξης, όταν ο ιός δεν έχει χτυπήσει ακόμα όλα τα κύτταρα του σώματος.
• Αποτελεσματική μέθοδος για τη διάγνωση της υποτροπής της παθολογίας.
• Ένας καινοτόμος τρόπος για τον προσδιορισμό της ράβδου Koch από τις πρώτες μέρες της ανάπτυξής της. Αυτό σας επιτρέπει να ξεκινήσετε γρήγορα τη σωστή θεραπεία και να σώσετε ένα άτομο από το θάνατο. Στα αρχικά στάδια ανάπτυξης, η παθολογία μπορεί να θεραπευτεί εντελώς χωρίς επιπλοκές.

Αυτή η μέθοδος διάγνωσης έχει πολλά πλεονεκτήματα και χρησιμοποιείται ενεργά σε διάφορα ιατρικά ιδρύματα. Ωστόσο, παρά τα πλεονεκτήματά της, η PCR έχει επίσης αρνητικά χαρακτηριστικά.

Ποια είναι τα μειονεκτήματα;

Τα μειονεκτήματα της διεργασίας αλυσίδας πολυμερούς περιλαμβάνουν:

• Το υψηλό κόστος της διαδικασίας.
• Η μέθοδος δεν είναι κατάλληλη για όσους έχουν ήδη υποβληθεί σε θεραπεία tbc, καθώς τα νεκρά μολυσματικά κύτταρα μπορούν να δώσουν ψευδή θετικό αποτέλεσμα.
• Όταν η μετάλλαξη των κυττάρων του DNA μπορεί να είναι ένα ψευδές αποτέλεσμα.
• Ο ειδικός πρέπει να πάρει σωστά το απαραίτητο βιολογικό υλικό για να προσδιορίσει τον τύπο της λοίμωξης και τον τόπο εντοπισμού του.
• Δεν επιτρέπεται πάντα για ασθενείς με πνευμονική νόσο.

Ποιος παρουσιάζει την ανάλυση;

Συχνά, μια τέτοια ανάλυση αποδίδεται:

• • Εάν τα αποτελέσματα του Mantoux έδωσαν αμφίβολα δεδομένα, το αίμα λαμβάνεται από μια φλέβα για τη φυματίωση.
  • Ο ασθενής είχε επαφή με μολυσμένο άτομο, αλλά ιατρική εξέταση δεν βοήθησε να προσδιοριστεί η σωστή διάγνωση.

• Κατά τη διάρκεια μιας επείγουσας επέμβασης, στην οποία πρέπει να γνωρίζετε το συντομότερο εάν ο ασθενής είναι μολυσμένος.
• Κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, όταν άλλες διαγνωστικές μέθοδοι δεν μπορούν να δώσουν ακριβές αποτέλεσμα χωρίς βλάβη στο έμβρυο.

Αφού εξετάσουμε όλα τα πλεονεκτήματα και τα μειονεκτήματα της διάγνωσης του tbc, μπορούμε να συμπεράνουμε ότι είναι καλύτερο να χρησιμοποιήσουμε ταυτόχρονα διάφορες διαγνωστικές μεθόδους για να κάνουμε μια ακριβή διάγνωση. Αυτό θα βοηθήσει να διασφαλιστεί ότι υπάρχει μια λοίμωξη στο σώμα και σε ποιο στάδιο της εξέλιξης είναι. Αφού ορίσετε σωστά τη διάγνωση, θα είναι δυνατό να ξεκινήσετε μια γρήγορη συντηρητική θεραπεία και να σώσετε ένα άτομο από το θάνατο.

Διάγνωση της φυματίωσης από PCR

Η φυματίωση είναι μια συγκεκριμένη λοίμωξη, η εστία της μπορεί να είναι στους ανθρώπινους ιστούς εδώ και χρόνια και στη συνέχεια να εξαπλωθεί για αρκετούς μήνες. Πρόκειται για μια χρόνια ασθένεια της οποίας τα βέλτιστα θεραπευτικά σχήματα είναι δύσκολο να επιλεγούν. Ένας από τους λόγους για αυτό είναι η καθυστερημένη διάγνωση, όταν τα μυκοβακτηρίδια, ενώ στο ανθρώπινο σώμα, έχουν ήδη προσαρμοστεί σε πολλά φάρμακα.

Ποιες είναι οι σύγχρονες μέθοδοι διάγνωσης; Διαγνωστικά PCR - τι είναι αυτό; Πώς γίνεται αυτή η έρευνα; Σε ποιες περιπτώσεις διαγιγνώσκεται η φυματίωση με αυτή τη μέθοδο και ποια είναι η ουσία της;

Τι είναι η διάγνωση PCR

Αυτή είναι μία από τις πιο σύγχρονες μεθόδους διάγνωσης όχι μόνο ασθενειών, αλλά και η ανίχνευση βιολογικού υλικού. Η διάγνωση της PCR επινοήθηκε σχετικά πρόσφατα. Περίπου 30 χρόνια πριν, το 1983, ένας Αμερικανός βιοχημικός, Carey Banks Mullis, πρότεινε ένα περίπλοκο σχέδιο αποκατάστασης για το βιολογικό υλικό των μικροοργανισμών σε ένα μικρό τμήμα. Χάρη στην ανακάλυψη του, ο επιστήμονας έλαβε το υψηλότερο βραβείο - το βραβείο Νόμπελ.

Τι είναι αυτό - διάγνωση λοιμώξεων από PCR; Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) είναι μια διάγνωση της ανίχνευσης ιικών ασθενειών, με βάση μεθόδους γενετικής μηχανικής. Χρησιμοποιείται ευρέως στην ιατρική μικροβιολογία, ανοσολογία και ιολογία. Η μέθοδος είναι καθολική και βοηθά στη διάγνωση με μικρή ποσότητα υλικού. Μία λοίμωξη μπορεί να ανιχνευθεί κυριολεκτικά στις πρώτες ώρες μόλυνσης με αυτήν, πολύ πριν εμφανιστούν τα πρώτα συμπτώματα της νόσου.

Η μέθοδος συνίσταται στην απόκτηση από το υλικό από ένα άρρωστο άτομο όχι το ίδιο το παθογόνο, αλλά θραύσματα του γονιδιώματος (σωματίδια ϋΝΑ), η βιοσύνθεση του με επακόλουθο προσδιορισμό σε ποια κατηγορία μικροοργανισμών ανήκει το γενετικό υλικό που λαμβάνεται μέσω μοριακών γενετικών μεθόδων.

Παρά το γεγονός ότι πρόκειται για μια περίπλοκη διαδικασία, απαιτείται πολύ λιγότερος χρόνος από πολλές βιολογικές μεθόδους ανίχνευσης μολυσματικών παραγόντων. Μέσα σε λίγες μόνο ώρες, ένας μικροοργανισμός μπορεί να ανιχνευθεί με PCR. Για να γίνει αυτό, δεν υπάρχει ανάγκη να το απομονώσετε από το περιβάλλον (αίμα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, πτύελα) και να το αναπτύξετε για μεγάλο χρονικό διάστημα σε τεχνητά θρεπτικά μέσα. Αρκεί να υπάρχει ένα μικρό κομμάτι του κλώνου DNA του μολυσματικού παράγοντα στο υπό μελέτη υλικό.

Η βάση της αντίδρασης είναι η δυνατότητα υπό τεχνητές συνθήκες (in vitro) να δημιουργηθεί η σύνθεση μορίων νουκλεϊκού οξέος του μολυσματικού παράγοντα.

Τι απαιτείται για την PCR;

1. Οι εκκινητές είναι τα τμήματα ϋΝΑ από τα οποία αρχίζει η βιοσύνθεση ή η δημιουργία.
2. Νουκλεοτίδια ή σύνθετες ενώσεις που αποτελούν τη βάση ενός μορίου ϋΝΑ ή RNA.
3. Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης είναι αδύνατη χωρίς την παρουσία πολυμεράσης, η οποία είναι ένα ένζυμο που επιταχύνει την PCR.

Στάδια διάγνωσης PCR

Πώς διεξάγεται η μοριακή διάγνωση με PCR; Η διαδικασία είναι απλή και απαιτεί μικρό χρονικό διάστημα, λαμβάνοντας υπόψη τη συλλογή υλικού.

1. Πριν από την έναρξη της μελέτης, παίρνουν το απαραίτητο βιολογικό υλικό - αυτό είναι το βρογχικό νερό πλυσίματος, το αίμα, το γαστρικό περιεχόμενο, τα πτύελα. Ο τύπος του βιολογικού υλικού εξαρτάται από το ύποπτο παθογόνο.
2. Μετουσίωση ή καταστροφή της αρχικής δομής του DNA, η οποία αποτελείται από δύο αλυσίδες. Η ουσία αυτού του σταδίου είναι να διαχωριστούν οι δύο αλυσίδες υπό την επίδραση της υψηλής θερμοκρασίας (το μέγιστο είναι 98 ºC, το οποίο διαρκεί όχι περισσότερο από δύο λεπτά).
3. Στο επόμενο στάδιο PCR, που ονομάζεται ανόπτηση, η θερμοκρασία μειώνεται κατά αρκετούς βαθμούς έτσι ώστε ο εκκινητής να δεσμεύεται στον κλώνο DNA.
4. Επιμήκυνση, κατά τη διάρκεια της οποίας λαμβάνει χώρα άμεσα η σύνθεση των επιθυμητών μορίων.

Ως αποτέλεσμα, μόνο 25-30 τέτοιοι κύκλοι λαμβάνουν τον απαραίτητο αριθμό αντιγράφων του DNA των μικροοργανισμών, οι οποίοι είναι εύκολο να αναγνωριστούν.

Η PCR απαιτεί διάγνωση φυματίωσης;

Δεν είναι δυνατό για όλα τα άτομα με υποψία φυματίωσης να εκτελέσουν PCR, καθώς η μέθοδος απαιτεί ακριβό εξοπλισμό. Δεν μπορούν όλες οι δημόσιες κλινικές να το αγοράσουν. Επιπλέον, συνέβη το γεγονός ότι οι συνήθεις μέθοδοι διάγνωσης μιας λοίμωξης στις περισσότερες περιπτώσεις δικαιολογούν επίσης τον εαυτό τους.

Αυτά περιλαμβάνουν:

• έρευνα ασθενών, ανάληψη ιστορικού.
• πλήρη εξέταση του προσώπου ·
• μια μελέτη που χρησιμοποιεί τη δοκιμή φυματίνης Mantoux.
• ακτινογραφία ή φθοριογραφία.
• διάγνωση ηλεκτρονικών υπολογιστών εάν είναι απαραίτητο.
• μεθόδους μικροβιολογικής έρευνας: μικροσκοπία επιφανειών και βακτηριολογική εξέταση πτυέλων.

Η PCR για τη φυματίωση πραγματοποιείται σε ειδικές περιπτώσεις όταν είναι δύσκολο να γίνει διάγνωση ή δεν είναι δυνατή η πραγματοποίηση άλλων εργαλειολογικών μεθόδων.

Παρά την πληθώρα των διαγνωστικών μεθόδων, η συχνότητα της φυματίωσης συνεχίζει να αυξάνεται. Επί του παρόντος, δεν υπάρχει μόνο η ανάπτυξή της αλλά και άλλα χαρακτηριστικά:

• η ασθένεια εμφανίζεται συχνά σε σοβαρή μορφή.
• ο αριθμός των θανατηφόρων περιπτώσεων αυξάνεται.
• όλο και πιο ανθεκτικές στη σύγχρονη χημειοθεραπεία διαγιγνώσκονται μορφές της νόσου.

Η απροθυμία του ίδιου του λαού να υποβληθεί σε τακτικές ιατρικές εξετάσεις ετησίως, η απόρριψη του εμβολιασμού οδηγεί στη διάδοση της φυματίωσης. Σε τέτοιες συνθήκες, χρειαζόμαστε γρήγορες, ενημερωτικές και αποτελεσματικές μεθόδους έρευνας που θα πρέπει να είναι προσιτές σε παιδιά και ενήλικες. Όλες οι παραπάνω διαγνωστικές μέθοδοι είναι πολύ κατώτερες από την PCR.

Οφέλη της διάγνωσης της φυματίωσης με PCR

Η έρευνα αυτή, αν και νέα, έχει αποδειχθεί καλά, ειδικά σε αμφιλεγόμενες περιπτώσεις όπου είναι αδύνατο να γίνει διάγνωση για διάφορους λόγους.

Χάρη στην PCR, είναι πολύ πιο εύκολο να ανιχνευθεί ο αιτιολογικός παράγοντας της φυματίωσης στο υλικό δοκιμής.

Τα πλεονεκτήματα της διάγνωσης PCR είναι τα ακόλουθα.

1. Αυτή είναι μια γρήγορη ανάλυση. Ένα μικρό κομμάτι του μορίου ϋΝΑ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να διαγνωστεί σε λίγες μόνο ώρες (περίπου πέντε), το οποίο χρησιμοποιείται με επιτυχία σε καταστάσεις έκτακτης ανάγκης όταν, για παράδειγμα, πριν από μια επιχείρηση είναι απαραίτητο να καθοριστεί αν ένα άτομο είναι άρρωστο με φυματίωση.
2. Η ανάλυση PCR επιτρέπεται στην περίπτωση που δεν υπάρχουν διαθέσιμες ή απαγορευμένες άλλες μέθοδοι (για την ανίχνευση της πνευμονικής φυματίωσης, μερικές φορές πρέπει να λάβετε αρκετές ακτινογραφικές εικόνες, οι οποίες θα είναι μια μεγάλη δόση ακτινοβολίας).
3. Με τη βοήθεια της PCR, κάθε βιολογικό περιβάλλον εξετάζεται για την παρουσία παθογόνου σε αυτό. Για παράδειγμα, μπορείτε να πραγματοποιήσετε μια μελέτη του εγκεφαλονωτιαίου υγρού, εάν υπάρχει υποψία φυματιώδους μηνιγγίτιδας.
4. Επιτρέπεται διάγνωση των μολυσματικών ασθενειών σε παιδιά, διότι η μέθοδος είναι ασφαλής.
5. Σας επιτρέπει να εντοπίσετε τον παθογόνο σε οποιοδήποτε στάδιο της νόσου.
6. Η υψηλή ευαισθησία της PCR καθιστά δυνατή την ανίχνευση του Mycobacterium tuberculosis, ακόμη και αν υπάρχουν λίγοι μικροοργανισμοί στο βιολογικό υλικό.
7. Είναι καλό να πραγματοποιηθεί η διάγνωση της υποτροπής της νόσου.

Μετά από όλα τα αναγνωσμένα PCR φαίνεται σχεδόν τέλεια διαγνωστική μέθοδος, η οποία θα πρέπει να κάνει όλους με υποψία φυματίωσης. Αλλά υπάρχουν και μειονεκτήματα εδώ, πρέπει να ληφθούν υπόψη.

Μειονεκτήματα της PCR στη διάγνωση της φυματίωσης

Στην εποχή μας, τέτοια διαγνωστικά είναι πιο σπάνια από την κανονικότητα. Και γι 'αυτό υπάρχει λόγος.

1. Αυτή είναι μια ακριβή μέθοδος έρευνας. Σε πολλές κλινικές, ο εξοπλισμός για PCR απουσιάζει λόγω του υψηλού κόστους του, αλλά η ανάλυση μπορεί ακόμα να γίνει σε καταβληθέντα εργαστήρια.
2. Αμέσως μετά τη θεραπεία, νεκρά μυκοβακτηρίδια ή που ζουν σε μικρές ποσότητες μπορεί να εξακολουθούν να υπάρχουν στο ανθρώπινο σώμα (το αποτέλεσμα θα είναι θετικό κατά τη διάρκεια της διάγνωσης PCR), οπότε η μέθοδος θα είναι αναξιόπιστη αυτή τη στιγμή, δεν έχει νόημα να το εκτελέσει.
3. Οι μεταλλάξεις των μυκοβακτηρίων οδηγούν σε αναποτελεσματική PCR - μια κανονική ακολουθία κλώνου DNA δεν μπορεί να συντεθεί.
4. Είναι απαραίτητο να επιλέξουμε το σωστό περιβάλλον για τη μελέτη, το αίμα λαμβάνεται μόνο εάν υπάρχει υποψία ότι είναι μολυσμένο (σηψαιμία), δεν υπάρχει λόγος να πάρουμε πτύελα εάν υπάρχει θέμα φυματίωσης των οργάνων του νευρικού συστήματος. Σε αυτή την περίπτωση, η PCR δεν θα είναι σε θέση να ανιχνεύσει τον παθογόνο παράγοντα και η διάγνωση δεν θα είναι ενημερωτική.

Ενδείξεις για την ανίχνευση της φυματίωσης χρησιμοποιώντας ανάλυση PCR

Η διάγνωση της φυματίωσης με PCR γίνεται πιο συχνά σε αμφιλεγόμενες περιπτώσεις. Πότε αναφέρονται οι γιατροί αυτή τη μελέτη;

1. Εάν είναι δύσκολο να γίνει μια διάγνωση χρησιμοποιώντας τις συνήθεις διαθέσιμες μεθόδους, αλλά υπήρξε επαφή με έναν ασθενή με φυματίωση.
2. Στην περίπτωση που ένα άτομο δεν μπορεί να παραδοθεί σε κλινική για να υποβληθεί σε συνήθεις εξετάσεις ρουτίνας για φυματίωση, είναι ευκολότερο να τον εξετάσει χρησιμοποιώντας PCR, καθώς τα πτύελα για τη δοκιμασία μπορούν να παραδοθούν σε βάζο και η διάγνωση επιβεβαιώνεται μέσα σε λίγες ώρες.
3. Αν κάποιος πρόκειται να έχει επείγουσα επέμβαση και είναι επείγον να μάθει εάν είναι άρρωστος με φυματίωση.
4. Εάν είναι απαραίτητο, μια έγκυος γυναίκα είναι επίσης καλύτερα να εξεταστεί για φυματίωση χρησιμοποιώντας PCR, δεδομένου ότι η μέθοδος είναι ασφαλής.
5. Με αμειβόμενη βάση, οποιοσδήποτε δεν έχει διαγνωσθεί με φυματίωση έχει επιβεβαιωθεί χρησιμοποιώντας βακτηριολογικές μεθόδους και ακτινοσκόπηση. Αυτό συμβαίνει όταν η βλάβη στους πνεύμονες είναι ανεπαίσθητη στην άμεση εικόνα και το άτομο κατά την παράδοση των πτυέλων για τη μελέτη δεν μπορούσε να ακολουθήσει τις συστάσεις για τη σωστή συλλογή υλικού. Σε αυτή την περίπτωση, το άτομο ανησυχεί για όλα τα συμπτώματα που χαρακτηρίζουν την πνευμονική φυματίωση.
6. Όταν υπάρχουν αμφιβολίες σχετικά με τα αποτελέσματα του τεστ Mantoux.
7. Είναι προτιμότερο να γίνει διάγνωση της φυματίωσης από τα παιδιά σε παιδιά. Η διαδικασία είναι ασφαλής, δεν δημιουργεί πρόσθετη έκθεση στην ακτινοβολία και είναι αποτελεσματική στην ανίχνευση των δυσκολιών διάγνωσης των μορφών της ασθένειας.

Η έγκαιρη διάγνωση της φυματίωσης είναι το κλειδί για τη σωστή συνταγογράφηση της θεραπείας και τη μείωση της εξάπλωσης της νόσου. Συχνά, οι γνωστές μέθοδοι ανίχνευσης ασθενειών δεν είναι πάντοτε αποτελεσματικές. Επομένως, η PCR σήμερα είναι ένας από τους πιο αξιόπιστους και ασφαλείς τρόπους ανίχνευσης της μόλυνσης στα αρχικά στάδια της ανάπτυξής της.