Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) για τη φυματίωση

Pleurisy

Η φυματίωση είναι μια από τις πιο επικίνδυνες ασθένειες από τις οποίες πάσχει η ανθρωπότητα εδώ και εκατοντάδες χρόνια. Παρόλο που οι επιστήμονες μπόρεσαν να εντοπίσουν τον αιτιολογικό παράγοντα και να εφεύρουν αντιβιοτικά για να το εξαλείψουν, η θεραπεία δεν είναι πάντα επιτυχημένη. Ο κύριος λόγος είναι μια μακρά περίοδος λανθάνουσας ή λανθάνουσας μορφής της ασθένειας, η οποία μπορεί να διαρκέσει αρκετά χρόνια. Η καθυστερημένη διάγνωση μειώνει σημαντικά τις πιθανότητες για αποκατάσταση και πλήρη ζωή του ασθενούς.

Τι είναι το PCR;

Για την ανίχνευση του mycobacterium tuberculosis στο σώμα για πάνω από εκατό χρόνια, η δοκιμή Mantoux έχει χρησιμοποιηθεί με επιτυχία. Άλλες μέθοδοι έχουν αποδειχθεί καλά: βακτηριολογική καλλιέργεια σε τεχνητό μέσο, ​​μικροσκοπία επίχρωσης, ELISA. Ωστόσο, ένας μεγάλος αριθμός επιπλοκών και ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων, καθώς και η διάρκεια ορισμένων μεθόδων, απαιτούσαν την εισαγωγή νέων τεχνολογιών στη διαγνωστική μεθοδολογία. Ένα τεράστιο επίτευγμα στον τομέα της μικροβιολογίας ήταν η εμφάνιση της ανάλυσης PCR για τη φυματίωση. Για αρκετές δεκαετίες, έχει δείξει την αποτελεσματικότητά του και χρησιμοποιείται ευρέως για τη διαφορική διάγνωση διαφόρων μορφών φυματίωσης.

PCR ανάλυση για φυματίωση ή αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης - μία μέθοδος για την ανίχνευση του βακτηριακού DNA, ή θραυσμάτων αυτού, με βάση την αύξηση των μορίων νουκλεϊκού οξέος από το ένζυμο DNA πολυμεράση. Για ένα θετικό αποτέλεσμα, αρκεί μόνο ένα μόριο του παθογόνου ϋΝΑ · επομένως, αυτή η μέθοδος θεωρείται εξαιρετικά ευαίσθητη. PRTS Η διάγνωση της φυματίωσης είναι πιο αποτελεσματική από τη σπορά των μυκοβακτηριδίων σε ένα τεχνητό περιβάλλον, δεδομένου ότι σε αντίθεση με τη μέθοδο της καλλιέργειας επιτρέπει να γίνεται διάκριση μεταξύ άγρια ​​και εμβολίου στελέχη BCG εμβολιαστεί. Αυτό αποτρέπει τα ψευδώς θετικά και καθιστά τη διάγνωση πιο ακριβή.

Οφέλη από την PCR

PCR διάγνωση της φυματίωσης μπορεί να ανιχνεύσει Koch ραβδί σε οποιοδήποτε βιολογικό μέσο οργανισμό με τον προσδιορισμό της ποσοτικής σύνθεσης τους, ακόμη και κατά το αρχικό στάδιο της ασθένειας, όταν μυκοβακτηρίδια βρίσκονται στην «αδρανοποίησης». Η διάγνωση της νόσου στη λανθάνουσα φάση επιτρέπει χρόνο για να ξεκινήσει προληπτική θεραπεία για την πρόληψη της ανάπτυξης των πνευμόνων εστίες της φλεγμονής και την εμφάνιση των επιπλοκών σε άλλα όργανα και συστήματα. Επιπλέον, η δοκιμή PCR για τη φυματίωση έχει αρκετά πλεονεκτήματα:

  • υψηλή ειδικότητα - 90-100%.
  • υψηλή ταχύτητα - από 4 ώρες έως 2 ημέρες.
  • υψηλή ευαισθησία, ιδιαίτερα στην ανοσοανεπάρκεια.
  • διαφορική διάγνωση.

Το κύριο πλεονέκτημα της μεθόδου είναι ότι η διάγνωση της φυματίωσης σε παιδιά από το CRC καθιστά δυνατή τη διάκριση της διαδεδομένης μορφής της ασθένειας από την περιορισμένη εστία, ακόμη και με αρνητικά αποτελέσματα από άλλες δοκιμές. Η διαφορική εξέταση σας επιτρέπει να επιλέξετε το σωστό θεραπευτικό σχήμα και να αυξήσετε την αποτελεσματικότητα της θεραπείας.

Η υψηλή εξειδίκευση της ανάλυσης επιτυγχάνεται με την εξάλειψη των διασταυρούμενων αντιδράσεων με άλλα μόρια νουκλεϊκού οξέος και η υψηλή ευαισθησία καθιστά δυνατή την ανίχνευση μυκοβακτηρίων ακόμη και σε μικρό όγκο του συλλεγόμενου υλικού. Η μέθοδος PCR των πτυέλων για φυματίωση έχει τη μεγαλύτερη αξιοπιστία, η ειδικότητά της φτάνει το 100% σε σύγκριση με τη μελέτη άλλων βιολογικών υλικών.

Ένας ειδικός μηχανισμός PCR παρέχει άφθονες ευκαιρίες για την ανίχνευση των κολλητών Koch σε ανοσοκατεσταλμένους ασθενείς. Σύμφωνα με τη μέθοδο ανάλυσης, η αντίδραση ανιχνεύει αντιγόνα, επομένως δεν έχει σημασία αν το σώμα παράγει αντισώματα στο παθογόνο ή όχι. Έτσι, είναι δυνατό να διαγνωσθούν εξωπνευμονικές μορφές της νόσου και προχωρημένες περιπτώσεις σε ασθενείς με ανακρίβειες στο ανοσοποιητικό σύστημα, κάτι που δεν είναι δυνατό με άλλες μεθόδους.

Μειονεκτήματα της μεθόδου

Παρά τα πολλά πλεονεκτήματα και την υψηλή ευαισθησία της ανάλυσης, η PCR για τη φυματίωση μπορεί να δώσει ψευδή αρνητικά αποτελέσματα. Δεδομένου ότι μια πολύ μικρή ποσότητα βιομάζας λαμβάνεται για διάγνωση, δεν αποκλείεται το γεγονός ότι το παθογόνο "κρύβεται" σε κύτταρο ή φλεγμονώδη εστίαση και δεν απελευθερώνεται έξω.

Η ευαισθησία αυτής της μεθόδου στα παιδιά είναι 25-80%. Για παράδειγμα, σε μια τυχαιοποιημένη μελέτη σε μια ομάδα ασθενών με κλινικά αποδεδειγμένη διάγνωση, μια εξέταση αίματος PCR για φυματίωση έδωσε θετικό αποτέλεσμα μόνο στο 50% των ασθενών. Από την άποψη αυτή, όταν δοκιμάζεται ένα παιδί για παθογόνα μυκοβακτήρια, δεν είναι δυνατόν να αντικατασταθεί μία διαγνωστική μέθοδος με άλλη. Προκειμένου να εξακριβωθεί πλήρως η απουσία λοίμωξης, είναι απαραίτητο να διεξαχθεί συνολική μελέτη με διάφορους τρόπους ταυτόχρονα.

Διαδικασία συλλογής

Η κύρια προϋπόθεση για την αξιοπιστία της διάγνωσης PCR είναι η συμμόρφωση με τους κανόνες συλλογής βιολογικών υγρών για ανάλυση. Το μολυσμένο ή ακατάλληλα συλλεγμένο υλικό μπορεί να προκαλέσει λανθασμένα αποτελέσματα. Η πιο κοινή είναι η πτύελα, αίμα ή ούρα, αλλά είναι δυνατόν να ληφθούν δείγματα των γαστρικών περιεχομένων για τη διαφορική διάγνωση ενός βαθύτερου, αρθρικό υγρό, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, βρογχικό ρευστό έκπλυσης, σπέρμα, προστάτη εκκρίσεις.

Η PCR για ούρηση για φυματίωση λαμβάνεται το πρωί μετά την εξωτερική υγιεινή των γεννητικών οργάνων με ούρηση σε αποστειρωμένο δοχείο. Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας είναι σημαντικό να μην αγγίζετε τα εσωτερικά τοιχώματα του περιέκτη για να αποτρέψετε την είσοδο μικροοργανισμών τρίτων. Οι γυναίκες που ζουν μια κανονική σεξουαλική ζωή θα πρέπει σίγουρα να βάλουν ένα ταμπόν στον κόλπο για να αποφύγουν την έκλυση τρίτων.

Μια εξέταση αίματος λαμβάνεται το πρωί με άδειο στομάχι και η PCR για πτύελα για φυματίωση μπορεί να γίνει οποιαδήποτε στιγμή της ημέρας με υποχρεωτική προηγούμενη στοματική υγιεινή. Αυτό είναι απαραίτητο για την αφαίρεση υπολειμμάτων τροφίμων που μπορεί να εισέλθουν στο δοχείο. Όταν εκφυλίζονται τα πτύελα, είναι σημαντικό να αποφευχθεί η εισχώρηση του σάλιου και της βλέννας από το ρινοφάρυγγα στο δοχείο, γεγονός που μπορεί να προκαλέσει παραμόρφωση των δεδομένων ανάλυσης.

Η μελέτη των περιεχομένων του στομάχου πραγματοποιείται στο νοσοκομείο νωρίς το πρωί, ενώ το πτύελο που καταπίνει ολονυκτίς βρίσκεται στο στομάχι. Για την ανίχνευση του mycobacterium tuberculosis, αυτή η μέθοδος καθιστά τριπλάσια σπορά, η οποία πιθανότατα καθιστά δυνατή την απομόνωση ενός βακίλου Koch.

Αποκωδικοποίηση αποτελεσμάτων

Η ποιοτική ανάλυση της PCR δίνει 2 τύπους αποτελεσμάτων "ανιχνευθέντων" ή "ανιχνευθέντων". Σημαίνουν θετική και αρνητική ετυμηγορία, αντίστοιχα. Η απάντηση "ανίχνευση" σημαίνει ότι το DNA του μολυσματικού παράγοντα υπάρχει στο δείγμα δοκιμής και με 97% πιθανότητα το σώμα να μολυνθεί από φυματίωση. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα δείχνει την απουσία ϋΝΑ κολλά Koch στη λήψη δειγμάτων βιολογικού υλικού, και δίνει 97% πιθανότητα ότι το σώμα δεν έχει πολλά των μυκοβακτηριδίων, και 60% ότι το άτομο δεν έχει μολυνθεί.

Η μεγαλύτερη ειδικότητα για τη διάγνωση της φυματίωσης είναι η εξέταση αίματος και τα πτύελα. Με θετικό αποτέλεσμα, δείχνουν λοίμωξη του σώματος, η οποία απαιτεί επείγοντα θεραπευτικά μέτρα. Μελέτες άλλων βιοϋλικών μπορεί να δείχνουν όχι την πορεία της νόσου, αλλά μόνο την παρουσία ξένων βακτηριδίων. Αυτό συμβαίνει όταν ένα άτομο είναι φορέας της ασθένειας, αλλά δεν διαδίδει τη μόλυνση στο περιβάλλον και δεν μολύνει τους υγιείς ανθρώπους.

Η ποσοτική ανάλυση PCR εκτελείται λιγότερο συχνά και ο θεράπων ιατρός ασχολείται με την αποκωδικοποίηση των αποτελεσμάτων του. Οι δείκτες της έρευνας χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό της δραστηριότητας της νόσου και του βαθμού βλάβης του σώματος. Με βάση τα δεδομένα που ελήφθησαν, ένας ειδικός μπορεί να καθορίσει την αποτελεσματικότητα της θεραπείας και, εάν είναι απαραίτητο, να προσαρμόσει το θεραπευτικό σχήμα.

Η φυματίωση υπήρξε και παραμένει ένα από τα σοβαρότερα προβλήματα για την υγεία ολόκληρης της ανθρωπότητας. Οι σύγχρονες διαγνωστικές μέθοδοι μπορούν να ανιχνεύσουν την ασθένεια σε πρώιμο στάδιο προκειμένου να ξεκινήσει η θεραπεία έγκαιρα. Δοκιμασία φυματίωσης, μικροσκοπία επιφανειών, καλλιέργεια βακτηρίων σε τεχνητά θρεπτικά μέσα έχουν αποδειχθεί στον τομέα της εργαστηριακής διάγνωσης της φυματίωσης. Ωστόσο, η μακρά αναμονή για τα αποτελέσματα και η αυξημένη συχνότητα των ψευδώς θετικών αναγνώσεων τους κατέστησαν απηρχαιωμένες και έφεραν στο προσκήνιο πιο προηγμένες τεχνολογίες. Η ανάλυση PCR είναι μια εξαιρετικά ειδική και εξαιρετικά αποτελεσματική μέθοδος διάγνωσης της φυματίωσης. Τα αποτελέσματά του είναι τα πιο αξιόπιστα μεταξύ όλων των προτεινόμενων εργαστηριακών μεθόδων για την ανίχνευση ραβδιών Koch. Επιτρέπει όχι μόνο την τελική ετυμηγορία, αλλά και τη διεξαγωγή της απαραίτητης διαφορικής διάγνωσης.

PCR διάγνωση της φυματίωσης σε παιδιά και ενήλικες: ενδείξεις για

Ο Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας αναγνώρισε πριν από 20 χρόνια ότι ο ρυθμός εξάπλωσης της φυματίωσης ήταν εκτός ελέγχου και έφθασε σε κλίμακα επιδημίας. Έκτοτε, η κατάσταση δεν βελτιώθηκε. Περισσότερα από ένα εκατομμύριο κρούσματα της νόσου διαγιγνώσκονται κάθε χρόνο, εκ των οποίων σχεδόν το ένα τέταρτο είναι θανατηφόρο. Την τελευταία δεκαετία, η συχνότητα εμφάνισης των παιδιών έχει αυξηθεί, οι περισσότερες μορφές της νόσου δεν προσφέρονται για συνήθη θεραπεία με αντιβιοτικά.

Σήμερα, ένα από τα παγκόσμια καθήκοντα για την ιατρική είναι η ανάπτυξη τέτοιων διαγνωστικών μεθόδων που θα επιτρέψουν την ταυτοποίηση της παθολογίας πριν από την εμφάνιση έντονων κλινικών συμπτωμάτων. Ένας από αυτούς είναι η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) για τη φυματίωση, η οποία βοηθά στην ανίχνευση ραβδιών που προκαλούν ασθένεια Koch στο αίμα, στα πτύελα και σε άλλα βιολογικά υγρά.

Διάγνωση της φυματίωσης

Οι εξετάσεις ελέγχου αποσκοπούν στην ανίχνευση ασθενών, φορέων φυματίωσης και πρόληψης της εξάπλωσης της λοίμωξης στην κοινωνία. Για τα παιδιά ηλικίας κάτω των 14 ετών, η δοκιμασία Mantoux χρησιμοποιείται μαζικά. Πρόκειται για μια ανοσολογική δοκιμασία στην οποία μια δόση φυματίνης εγχέεται υποδόρια - ένα σύνθετο μείγμα του γενετικού υλικού πολλών τύπων μυκοβακτηριδίων. Η εμφάνιση μιας έντονης αντίδρασης υποδεικνύει μια ενεργό μολυσματική διαδικασία.

Για προληπτική εξέταση σε ενήλικες που χρησιμοποιούν φθορίωση ή ακτίνες Χ. Αυτές οι μέθοδοι συμβάλλουν στην απεικόνιση των παθολογικών βλαβών στον πνευμονικό ιστό. Παρόλα αυτά, προκαλεί δυσκολίες στη διαφοροποίηση της φυματίωσης από μια άλλη οργανική παθολογία (κακοήθη και καλοήθη νεοπλάσματα, φλεγμονώδεις διεργασίες, παρασιτικές επιδρομές, επαγγελματική πνευμονική βλάβη).

Για να αποσαφηνιστεί η δομή και το μέγεθος της παθολογικής εστίασης, ενδέχεται να χρειαστούν επιπρόσθετες οργανικές μελέτες:

  • στοχευμένη ακτινογραφία.
  • υπολογιστική τομογραφία.
  • απεικόνιση μαγνητικού συντονισμού.

Μέθοδοι διάγνωσης της φυματίωσης

Στην περίπτωση αμφιλεγόμενων αποτελεσμάτων και για το διορισμό κατάλληλης θεραπείας, υπάρχει ανάγκη για ακριβέστερες διαγνωστικές μεθόδους που καθιστούν δυνατή την απομόνωση του παθογόνου παράγοντα. Μικροσκοπική και βακτηριολογική εξέταση των πτυέλων χρησιμοποιείται για την επιβεβαίωση των πνευμονικών μορφών φυματίωσης για μεγάλο χρονικό διάστημα.

Τα τελευταία χρόνια, η συχνότητα εμφάνισης μυκοβακτηριδίου διαφόρων οργάνων και συστημάτων - νεφρών, οστών, εντέρων, δέρματος - έχει γίνει συχνότερη. Για τον εντοπισμό αυτών των μορφών φυματίωσης, υπερηχογραφικών εξετάσεων, καλλιέργειας ούρων και περιττωμάτων, μπορούν να χρησιμοποιηθούν ενδοσκοπικές εξετάσεις.

Η διάγνωση της ΡΒΚ για τη φυματίωση θα βοηθήσει στην επιβεβαίωση της παρουσίας ραβδιών Koch στο αίμα, καθώς και της ευαισθησίας της σε ορισμένα φάρμακα. Αυτή είναι μια πολύ αποτελεσματική μέθοδος που βασίζεται στην ανίχνευση του βακτηριακού γενετικού υλικού σε διάφορα βιολογικά υγρά.

Ειδικότητα και ενδείξεις

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης είναι μια πολύ ευαίσθητη μικροβιολογική διαγνωστική μέθοδος, η οποία βασίζεται στις αρχές της γενετικής μηχανικής. Για να επιβεβαιωθεί η παρουσία ενός παθογόνου παράγοντα σε ένα βιολογικό υλικό, αρκεί να ανιχνευθεί ένα μοναδικό θραύσμα νουκλεϊκού οξέος γι 'αυτό. Η PCR για τη φυματίωση μπορεί να ανιχνεύει τα βακτήρια στο αίμα, τα πτύελα, τα ούρα.

Προς το παρόν, ανέπτυξε διάφορες μεθόδους ανάλυσης. Τα πιο δημοφιλή μεταξύ τους είναι τα εξής:

  • PCR σε πραγματικό χρόνο.
  • τεχνολογία μικρορευστών ·
  • την αλληλούχιση και την πυροεπιλογή.

PCR σε πραγματικό χρόνο

Τα εργαστήρια χρησιμοποιούν συχνότερα αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο, καθώς μειώνουν τον αριθμό των ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων και η ίδια η διαδικασία ανάλυσης διαρκεί λίγο χρόνο.

Δεδομένου του μεγάλου αριθμού κρυφών μορφών της νόσου και της αναποτελεσματικότητας των τυποποιημένων διαγνωστικών μεθόδων, η PCR χρησιμοποιείται όλο και περισσότερο. Ο σκοπός αυτής της ανάλυσης παρουσιάζεται σε:

  • τον εντοπισμό ύποπτων περιοχών στην ακτινογραφία.
  • αμφισβητήσιμα αποτελέσματα δοκιμασίας φυματίνης.
  • η αδυναμία διεξαγωγής μικροσκοπικής και βακτηριολογικής ανάλυσης πτύων σε άτομα σε σοβαρή κατάσταση ·
  • διεξαγωγή χειρουργικών επεμβάσεων όταν είναι απαραίτητο να εξασφαλιστεί γρήγορα ότι δεν υπάρχει μόλυνση.
  • το απαράδεκτο της χρήσης φθορογραφίας, ακτίνων Χ ή υπολογιστικής τομογραφίας (για παράδειγμα, σε εγκύους και θηλασμού, σε περιπτώσεις υπερβολικής έκθεσης στην ακτινοβολία) ·
  • υποψία εξωπνευμονικής φυματίωσης (συνιστάται να χρησιμοποιείται όχι μόνο το αίμα αλλά και το φλέγμα).

Η διάγνωση της φυματίωσης από την PCR έχει αποδειχθεί στην εξέταση των παιδιών, λόγω της έλλειψης πρόσθετης έκθεσης και των ταχέων αποτελεσμάτων.

Διαδικασία προετοιμασίας και ανάλυσης

Δεν απαιτείται ειδική προετοιμασία για PCR αίματος. Ωστόσο, για να αποφευχθούν οι επιπλοκές της δειγματοληψίας αίματος και για να ληφθεί υλικό υψηλής ποιότητας, πρέπει να ακολουθούνται οι ακόλουθοι γενικοί κανόνες:

  • η ανάλυση πρέπει να λαμβάνεται το πρωί όχι νωρίτερα από 2 ώρες μετά το ξύπνημα.
  • Πρέπει να περιορίζει την πρόσληψη λιπαρών και τηγανισμένων τροφών την ημέρα πριν από τη δειγματοληψία αίματος.
  • αποφεύγετε να τρώτε, τσάι και καφέ για 8-9 ώρες, επιτρέπεται να πίνετε καθαρό νερό,
  • Μην καπνίζετε για τουλάχιστον 3-4 ώρες.

Σε περίπτωση μόνιμης φαρμακευτικής αγωγής (ορμόνες, αντιπηκτικά, αντιφλεγμονώδη φάρμακα, αντιβιοτικά, αραιωτικά αίματος), πρέπει να ενημερώσετε σχετικά τον εργαστηριακό βοηθό.

Κατά την παράδοση των πτυέλων, θα πρέπει να βουρτσίζετε τα δόντια σας καλά και να ξεπλένετε το στόμα σας αρκετές φορές. Συλλέξτε υλικό σε αποστειρωμένο δοχείο. Για καλύτερα αποτελέσματα, μπορεί να ληφθεί αποχρεμπτικό ή βλεννολυτικό μέσο το βράδυ.

Η ίδια η διάγνωση αποτελείται από διάφορα στάδια.

    Υλικό φράχτη. Μπορεί να πραγματοποιηθεί στο εργαστήριο και εξ αποστάσεως. Ορισμένοι τύποι υλικού που ο ασθενής συλλέγει ανεξάρτητα (ούρα, φλέγμα).

Η καταστροφή της δομής των νουκλεϊνικών οξέων (μετουσίωση μορίων DNA και RNA). Για να γίνει αυτό, το υλικό δοκιμής θερμαίνεται σε θερμοκρασία 98 μοίρες και διατηρείται για αρκετά λεπτά. Ως αποτέλεσμα, η διπλή έλικα ξετυλίγεται, σχηματίζονται μονόκλωνα μόρια.

  • Ανόπτηση Μετά την προσθήκη ενός εκκινητή (μικρού τμήματος νουκλεϊκού οξέος), η θερμοκρασία μειώνεται κατά αρκετούς βαθμούς, ενεργοποιείται η πολυμεράση.
  • Αναγνώριση. Η θερμοκρασία φτάνει στο βέλτιστο επίπεδο, η δραστικότητα του ενζύμου φτάνει στο μέγιστο και η δεύτερη αλυσίδα ολοκληρώνεται σύμφωνα με τον κανόνα της συμπληρωματικότητας Chargaff.
  • Για να ολοκληρωθεί η μελέτη, είναι απαραίτητο να συντεθεί ο απαιτούμενος αριθμός μορίων DNA - περίπου 50 κύκλοι της παραπάνω αντίδρασης. Χρειάζονται περίπου 2-3 ​​ώρες. Ένα θετικό αποτέλεσμα της αντίδρασης δεν δείχνει πάντα το ενεργό στάδιο της νόσου, αλλά είναι ένας δείκτης της παρουσίας ενός μικροοργανισμού στο σώμα.

    Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα της μεθόδου

    Σε σύγκριση με άλλες μικροβιολογικές μεθόδους, η PCR δεν απαιτεί πολύ χρόνο για να ανιχνεύσει το Mycobacterium tuberculosis χρησιμοποιώντας PCR, το αποτέλεσμα μπορεί να ληφθεί την ημέρα της δοκιμής.

    Ένα άλλο πλεονέκτημα είναι η υψηλή εξειδίκευση της ανάλυσης, η οποία καθιστά δυνατή την ανίχνευση της παρουσίας του παθογόνου παράγοντα με ακρίβεια 90-95% σε σχεδόν οποιοδήποτε βιολογικό υλικό (αίμα, ούρα, κόπρανα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, πτύελα, έκπλυση βρόγχων).

    Ωστόσο, υπάρχουν πολλά μειονεκτήματα της μεθόδου:

    • ένα μάλλον υψηλό ποσοστό ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων (έως και 15%), που συνδέεται με την ανίχνευση μη ζωντανών μικροοργανισμών.
    • σε ορισμένες περιπτώσεις, μπορείτε να παραλείψετε το γεγονός της ασθένειας, καθώς το Mycobacterium tuberculosis συχνά υποβάλλεται σε μεταλλάξεις και αλλαγές γενετικού υλικού του.
    • χαμηλή αποτελεσματικότητα στην εξέταση ατόμων με ανοσοανεπάρκεια ·
    • το υψηλό κόστος της έρευνας, την ανάγκη για ακριβό εξοπλισμό και αντιδραστήρια.

    Τι μπορεί να αντικατασταθεί;

    Δεδομένης της ποικιλίας μορφών μόλυνσης από φυματίωση, για πιο ακριβή διάγνωση και επιλογή θεραπείας είναι απαραίτητο να συνδυαστούν διάφορες διαγνωστικές μελέτες:

      Υποχρεωτική ανάλυση για παιδιά είναι η δοκιμή Mantoux. Εάν η εισαγωγή της φυματίνης (γενετικό υλικό των μυκοβακτηριδίων) εμφανίζει έντονη αντίδραση, μπορεί να θεωρηθεί λοίμωξη με βακίλο φυματίωσης.

    Οι μέθοδοι ακτίνων Χ μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την απεικόνιση της παθολογικής εστίασης. Στη διάγνωση της εξωπνευμονικής φυματίωσης, χρησιμοποιούνται ενδοσκοπικές μέθοδοι με ταυτόχρονη βιοψία:

    • η βρογχοσκόπηση βοηθά στην αναγνώριση των βλαβών του λάρυγγα, της τραχείας, των βρόγχων.
    • κολονοσκόπηση - έντερα.
    • κυστεουρεθροσκόπηση - όργανα του ουροποιητικού συστήματος.
    • Υστεροσκόπηση - γυναικεία γεννητικά όργανα. Αυτές οι μέθοδοι δεν είναι συγκεκριμένες, για την ακριβή διάγνωση, πρέπει να εντοπιστεί ο παθογόνος παράγοντας.

    Οι γενικές κλινικές δοκιμές θα βοηθήσουν στον πιο συγκεκριμένο προσδιορισμό της κατάστασης του σώματος. Απαιτείται πλήρης αιμοληψία με τύπο λευκοκυττάρων.

    Η αύξηση του αριθμού των ουδετερόφιλων με μειωμένο επίπεδο λεμφοκυττάρων και η αύξηση του ποσοστού καθίζησης των ερυθροκυττάρων (ESR) υποδεικνύει μια ενεργή φλεγμονώδη διαδικασία βακτηριακής αιτιολογίας. Αποκλείστε τη βλάβη στα όργανα του ουροποιητικού συστήματος χρησιμοποιώντας μια γενική ανάλυση ούρων και καλλιέργεια για αποστείρωση.

    Η PCR είναι σήμερα διαθέσιμη στα περισσότερα ιδιωτικά εργαστήρια. Αυτό απαιτεί όχι μόνο υψηλά ειδικευμένους ειδικούς, αλλά και ακριβό εξοπλισμό, μεγάλο αριθμό αντιδραστηρίων. Ως εκ τούτου, η χρήση αυτής της μεθόδου είναι περιορισμένη παρά την υψηλή ακρίβεια και την ειδικότητά της.

    Ανάλυση PCR για τη διάγνωση της φυματίωσης

    Η ιατρική δεν παραμένει σταθερή και μέχρι σήμερα οι προόδους στον τομέα της υγείας καθιστούν δυνατή τη διάγνωση και τη θεραπεία πολλών παλαιότερων παθήσεων. Υπάρχουν επίσης ασθένειες που δεν μπορούν να ανιχνευθούν με οπτικό έλεγχο. Η φυματίωση ήταν πάντα μεταξύ τους. Είναι μια επικίνδυνη μολυσματική ασθένεια που επηρεάζει τους πνεύμονες, τις αρθρώσεις και τα οστά και συχνά οδηγεί στο θάνατο ακόμη και στις μέρες μας. Οι διαγνωστικές μέθοδοι για αυτή την ασθένεια έχουν βελτιωθεί, γεγονός που καθιστά δυνατή την ανίχνευση της νόσου σε προγενέστερα στάδια όταν είναι θεραπεύσιμη. Μεταξύ αυτών δεν είναι μόνο οι εξετάσεις ακτίνων Χ και Mantoux, αλλά και η PCR για τη φυματίωση.

    Φυματίωση - τι είναι αυτό

    Προηγουμένως, η φυματίωση ονομάζεται ξηρή ασθένεια ή φθίση. Πρόκειται για μια βακτηριακή λοίμωξη που επηρεάζει συχνότερα τους πνεύμονες. Οι εξωπνευμονικές του μορφές - η φυματίωση των οστών και των αρθρώσεων, η φυματιώδης μηνιγγίτιδα - είναι λιγότερο συχνά και πιο προχωρημένα στάδια. Ο αιτιολογικός παράγοντας αυτής της μολυσματικής νόσου είναι μυκοβακτήρια. Ο βακίλος της φυματίωσης ονομάζεται επίσης ραβδί του Koch.

    Η μόλυνση από την φυματίωση είναι πολύ μεταδοτική, μεταδίδεται από σταγονίδια στα αεροσκάφη κατά το βήξιμο και το φτάρνισμα του ασθενούς. Η μόνη προστασία έναντι αυτής της ασθένειας είναι το έγκαιρα χορηγούμενο εμβόλιο. Δεν προστατεύει από τη μόλυνση, αλλά δεν επιτρέπει βακίλλους να εισέλθουν στο σώμα για να προκαλέσουν φυματίωση.

    Μορφές φυματίωσης

    Η νόσος μπορεί να εμφανιστεί τόσο σε ανοικτή όσο και σε κλειστή μορφή. Οι διαφορές είναι οι εξής:

    • κλειστή φυματίωση είναι ασυμπτωματική. Σε τέτοιες περιπτώσεις, η ράβδος Koch στο πτύελο είναι αδύνατο να ανιχνευθεί, επομένως, τα μολυσμένα δεν είναι επικίνδυνα για το περιβάλλον. Μια τέτοια πορεία της νόσου συνήθως δεν απειλεί ακόμη και τα πλέον μολυσμένα, αλλά υπάρχουν και εξαιρέσεις - σε μια περίπτωση των δέκα, η κλειστή φυματίωση μπορεί να εισέλθει σε ανοιχτή μορφή.
    • με ανοικτή μορφή, τα μυκοβακτηρίδια που προκαλούν φυματίωση βρίσκονται στο σάλιο και τα πτύελα του ασθενούς. Ένας μολυσμένος οργανισμός παρουσιάζει μεγάλο κίνδυνο για την κοινωνία, ακόμη και μεμονωμένα. Κατά κανόνα, η νόσος επηρεάζει πρώτα τους πνεύμονες. Εάν δεν διαγνωστεί νωρίς, μπορεί να λάβει άλλες μορφές, όπως η φυματίωση των οστών ή των αρθρώσεων.

    Η ανοικτή μορφή της φυματίωσης διαγιγνώσκεται με διάφορους τρόπους. Ο ασθενής υποβάλλεται σε ακτινογραφία θώρακα ή ακτινογραφία θώρακα, αναλύσεις του βιολογικού υλικού του ή δοκιμή δέρματος Mantoux. Πρόσφατα, προέκυψε μια άλλη μέθοδος που θεωρείται εξίσου αποτελεσματική - η ανάλυση της αλυσωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR).

    Τι σημαίνει η PCR;

    Στην ιατρική πρακτική, οι μέθοδοι διάγνωσης αυτής ή αυτής της ασθένειας με ανίχνευση του DNA ή του RNA στο ανθρώπινο σώμα έχουν χρησιμοποιηθεί από καιρό. Αυτή είναι ακριβώς η PCR για τη φυματίωση. Αυτή είναι μια ανάλυση υψηλής ακρίβειας του αίματος ή άλλου βιολογικού υγρού, που σας επιτρέπει να εντοπίσετε τα βακτήρια με ελάχιστη συγκέντρωση στο επιλεγμένο υλικό, αρκεί ένα μόνο κελί. Η μελέτη διεξάγεται χρησιμοποιώντας ένα ειδικό ένζυμο πολυμεράσης.

    Πλεονεκτήματα της μεθόδου

    Η PCR είναι μια διαγνωστική μέθοδος που έχει αποδειχθεί από την καλύτερη πλευρά, έτσι χρησιμοποιείται αρκετά συχνά, και σε συνδυασμό με άλλες μεθόδους και ανεξάρτητα. Τα πλεονεκτήματά του:

    • τους συντομότερους όρους παραγωγής. Η μελέτη διεξάγεται γρήγορα, σε περίπου 5 ώρες χρησιμοποιώντας PCR μπορεί να ανιχνεύσει την παρουσία βακίλου φυματίωσης στο βιολογικό υγρό του ασθενούς. Αυτό ισχύει ιδιαίτερα εάν πρέπει να κάνετε άμεση χειρουργική επέμβαση και πριν από αυτό να πάρετε μια ακριβή διάγνωση.
    • Συμβαίνει ότι οι άλλες διαγνωστικές μέθοδοι αντενδείκνυνται στον ασθενή. Για παράδειγμα, οι ακτίνες Χ μπορούν να γίνουν με κανέναν τρόπο. Επιπλέον, η εικόνα δεν είναι πάντοτε δυνατή για διάγνωση, ειδικά εάν η ασθένεια βρίσκεται σε πρώιμο στάδιο. Με τη βοήθεια της μεθόδου PCR, το παθογόνο ανιχνεύεται αμέσως.
    • Το βιολογικό υγρό κάθε ασθενούς είναι κατάλληλο για ανάλυση. Διεξάγεται PCR ούρων και σάλιου για φυματίωση για την αναγνώριση πνευμονικών και εξωπνευμονικών μορφών. Η μελέτη διεξάγεται επίσης χρησιμοποιώντας το νωτιαίο υγρό του ασθενούς για την ανίχνευση φυματιώδους μηνιγγίτιδας.
    • Η μέθοδος είναι απολύτως ασφαλής. Για να το κάνει, αρκεί να αποκτηθεί ένα βιολογικό υγρό από τον ασθενή. Η διάγνωση της φυματίωσης στα παιδιά σε παιδιά είναι βολική και αβλαβής, καθώς η εξέταση ακτίνων Χ επιτρέπεται μόνο από την ηλικία των 18 ετών και η δοκιμή Mantoux προκαλεί μερικές φορές ανεπιθύμητες ενέργειες.
    • Η PCR είναι μια εξαιρετικά ευαίσθητη ανάλυση. Σας επιτρέπει να προσδιορίσετε τα ραβδιά Koch με ελάχιστη συγκέντρωση μυκοβακτηριδίων.
    • Με τη βοήθεια ενός ειδικού ενζύμου πολυμεράσης, μια πάθηση διαγιγνώσκεται σε οποιοδήποτε στάδιο, από πρώιμα έως προχωρημένα.
    • αυτή η μέθοδος είναι αποτελεσματική στη διάγνωση της υποτροπής της νόσου.
    • Αυτή η μέθοδος είναι μια σημαντική ανακάλυψη για την ακριβή διάγνωση στα αρχικά στάδια της νόσου. Αυτό σας επιτρέπει να ξεκινήσετε τη θεραπεία το συντομότερο δυνατό και να καταστρέψετε τους παθογόνους παράγοντες, όταν δεν έχουν ακόμη αρνητικές συνέπειες για τα όργανα και τα συστήματα του ανθρώπινου σώματος.

    Πού να γίνει ανάλυση PCR για τη φυματίωση

    Αν και η ανάλυση PCR για τη φυματίωση είναι μια πολύ αποτελεσματική μέθοδος για τη διάγνωση αυτής της πάθησης, χρησιμοποιείται σπάνια μόνος της. Κατά κανόνα, αυτή είναι μια πρόσθετη μέθοδος ανίχνευσης της φυματίωσης και χρησιμοποιείται σπάνια. Το γεγονός είναι ότι αυτή η μέθοδος είναι αρκετά δαπανηρή.

    Οι δημόσιες κλινικές δεν έχουν την ευκαιρία να αγοράσουν ειδικό εξοπλισμό για την ανάλυση PCR και η κυβέρνηση δεν βλέπει το σημείο στη χρηματοδότηση αυτού του άρθρου, καθώς η φυματίωση μπορεί να διαγνωστεί με άλλους τρόπους. Μια τέτοια μελέτη πραγματοποιείται συχνότερα σε ιδιωτικές κλινικές που μπορούν να αγοράσουν τον απαραίτητο εξοπλισμό.

    Μειονεκτήματα της μεθόδου

    Η υψηλή τιμή δεν είναι το μόνο μειονέκτημα της PCR. Εκτός από το υψηλό κόστος, η μέθοδος έχει άλλα μειονεκτήματα και ελλείψεις, για παράδειγμα:

    • Η PCR για τη φυματίωση δίνει ένα θετικό αποτέλεσμα ακόμα και μετά τη θεραπεία, καθώς λαμβάνει νεκρά κύτταρα ως ζωντανά βακτήρια, επομένως αυτή η μέθοδος δεν είναι κατάλληλη ως εξέταση ελέγχου του ασθενούς για επιβεβαίωση της ανάρρωσής του.
    • οι βακίλοι φυματίωσης μεταλλάσσονται και το DNA τους τροποποιείται, γεγονός που μπορεί να επηρεάσει την αξιοπιστία του αποτελέσματος.
    • Οι εξετάσεις αίματος PCR για φυματίωση σπάνια εκτελούνται, καθώς η παρουσία Koch sticks σε αυτά τα βιολογικά υγρά είναι εξαιρετικά δύσκολο να ανιχνευθεί. Αυτό είναι δυνατό μόνο στα τελευταία στάδια ή σε σηψαιμία. Συνήθως, ο πτύελος του ασθενούς λαμβάνεται για διάγνωση.

    Αξίζει να σημειωθεί ότι το ακριβέστερο αποτέλεσμα είναι ακριβώς η συλλογή των περιεχομένων του στομάχου του ασθενούς. Εάν υπάρχει υποψία πνευμονικής φυματίωσης, η καλλιέργεια των πτυέλων θα είναι ο αποτελεσματικότερος τρόπος διάγνωσης της νόσου. Εάν ο ασθενής έχει εξωπνευμονική μορφή, τότε μπορεί να μην υπάρχουν βακτηρίδια σε αυτό το βιολογικό περιβάλλον. Για τον προσδιορισμό της φυματίωσης των οστών, των αρθρώσεων κ.λπ. χρησιμοποιώντας PCR, απαιτείται ένα άλλο βιολογικό υγρό, για παράδειγμα το νωτιαίο υγρό.

    Πώς είναι η PCR για τη φυματίωση

    Όπως περιγράφηκε προηγουμένως, η ουσία της ανάλυσης PCR είναι η ανίχνευση του DNA του παθογόνου στο βιολογικό υγρό του ασθενούς με την αντίδραση πολυμεράσης. Τα κύρια στάδια της μεθόδου:

    1. Δειγματοληψία βιολογικών υλικών. Η PCR δεν είναι μόνο μια αιμοστατική - η βιομάζα που μελετάται μπορεί να είναι σάλιο, ούρα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, βρογχικό υγρό πλύσης, περιεχόμενα του στομάχου, πτύελα.
    2. Μετά από αυτό, η βιομάζα εκτίθεται σε υψηλές θερμοκρασίες για να καταστρέψει τη δομή DNA του παθογόνου.
    3. Στη συνέχεια, η θερμοκρασία μειώνεται βαθμιαία και ένα αστάρι προσαρτάται στο κατεστραμμένο στοιχείο DNA.
    4. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα της μοριακής σύνθεσης, η οποία διαρκεί περίπου 30 κύκλους, ανιχνεύεται το στέλεχος συγκεκριμένων παθογόνων βακτηριδίων ή η απουσία του.

    Αυτή η ανάλυση απαιτεί καλή χρηματοδότηση, επομένως η PCR δεν γίνεται πολύ συχνά. Ωστόσο, αυτή η μέθοδος δεν είναι ίση, όταν απαγορεύονται άλλες επιλογές διάγνωσης ή σε περίπτωση έκτακτης ανάγκης, όταν δεν υπάρχει χρόνος να περιμένουμε το αποτέλεσμα.

    Συνοψίζοντας

    Εν κατακλείδι, μπορούμε να καταλήξουμε στα ακόλουθα συμπεράσματα:

    • Η PCR είναι μια πολύ ακριβής ανάλυση που μπορεί να ανιχνεύσει τη φυματίωση λίγες ημέρες μετά τη μόλυνση.
    • αυτή η ανάλυση γίνεται σε 3,5 - 5 ώρες, οπότε στην περίπτωση που ο λογαριασμός πηγαίνει στο ρολόι, είναι αναντικατάστατος.
    • είναι μια ασφαλής μέθοδος που δεν έχει παρενέργειες.
    • Χρησιμοποιείται όταν άλλες διαγνωστικές μέθοδοι έχουν δείξει ασυνεπή αποτελέσματα ή αντενδείκνυται η χρήση τους.

    Ωστόσο, η PCR γίνεται σπάνια, δεδομένου ότι είναι μια δαπανηρή ανάλυση που απαιτεί την εγκατάσταση ειδικού εξοπλισμού. Επιπλέον, δεν είναι πάντα ενημερωτικό, έτσι οι εμπειρογνώμονες χρησιμοποιούν αυτή τη μέθοδο ανίχνευσης της φυματίωσης ως πρόσθετη.

    Ανάλυση PCR (διάγνωση) φυματίωσης

    Φυματίωση ή κατανάλωση - μία από τις πιο δημοφιλείς μολυσματικές ασθένειες του 21ου αιώνα. Τα παθογόνα είναι ειδικά μικροβακτήρια - sticks Koch.

    Η ασθένεια εξαπλώνεται όχι μόνο στους πνεύμονες, αλλά και στον εγκέφαλο, την πέψη, στις αρθρώσεις ή στη σπονδυλική στήλη, στο ουροποιητικό σύστημα και στο δέρμα.

    Σύμφωνα με την ΠΟΥ, 10 εκατομμύρια άνθρωποι υποφέρουν από φυματίωση κάθε χρόνο, εκ των οποίων τα 3 εκατομμύρια είναι θανατηφόρα.

    Η κατάσταση είναι ιδιαίτερα λυπηρή στην επικράτεια των χωρών της ΚΑΚ, εδώ εμφανίζονται φυματιώδεις επιδημίες. Η Ρωσία, το Καζακστάν και η Ουκρανία είναι επικεφαλής μιας θλιβερής διαβάθμισης για την εξάπλωση αυτής της λοίμωξης.

    Η λοίμωξη μεταδίδεται εύκολα με αερομεταφερόμενα σταγονίδια ή μέσω του πεπτικού συστήματος, επηρεάζει ζωτικά όργανα και είναι επίσης σε θέση να προσαρμοστεί γρήγορα στα πολυμερή φάρμακα και τη χημειοθεραπεία.

    Ένας από τους κύριους παράγοντες για την επιτυχή αντιμετώπιση της φυματίωσης είναι η έγκαιρη ανίχνευση της λοίμωξης.

    Διαγνωστικές μέθοδοι

    Η ανθρωπότητα έχει εφεύρει πολλές μεθόδους για την αναγνώριση μιας επικίνδυνης ασθένειας. Η διάγνωση της φυματίωσης διαιρείται σε όργανο και εργαστήριο.

    Στην πρώτη περίπτωση, μια εξέταση αίματος για φυματίωση, καθώς και πτύελα, ούρα.

    Η δεύτερη ομάδα είναι μια μελέτη που χρησιμοποιεί ακτίνες Χ και ενδοσκόπηση. Οι μέθοδοι διάγνωσης της φυματίωσης με τη σειρά της είναι ακτινοβολία και χειρουργική.

    Τύποι μεθόδων ακτινοβολίας για την εύρεση της νόσου

    • Η φθοριογραφία είναι μια μέθοδος διάγνωσης μιας ασθένειας που είναι γνωστή σε κάθε κάτοικο της ΚΑΚ. Χρησιμοποιώντας ακτινογραφίες, εξετάζονται οι πνεύμονες και οι μυωικοί λεμφαδένες.
    • Ακτινογραφία θώρακος - παρόμοια με τη φθοριογραφία, αλλά μια καλύτερη μέθοδος ανίχνευσης της λοίμωξης. Η εικόνα αποκτάται με περισσότερες λεπτομέρειες και σε δύο προβολές, αλλά αυτή η διαδικασία είναι περίπου έξι φορές πιο ακριβή. Συνήθως χρησιμοποιείται μετά την εμφάνιση σοβαρών υποψιών για την ασθένεια.
    • Η υπολογισμένη τομογραφία πραγματοποιείται ως πρόσθετη διάγνωση, η οποία χρησιμοποιείται επίσης μετά από έναν καλό λόγο για την παρουσία λοίμωξης.

    Οι χειρουργικές μέθοδοι διάγνωσης περιλαμβάνουν βρογχική ενδοσκόπηση, καθώς και μεσολυτοσκόπηση και θωρακοκοσκόπηση.

    Η πρώτη μέθοδος είναι η μελέτη του βρογχικού δένδρου των πνευμόνων με τη βοήθεια ενός "καθετήρα" σε αυτό το όργανο. Οι υπόλοιπες δύο μέθοδοι καθιστούν δυνατή τη μελέτη του πλευρικού τμήματος του πνεύμονα με διάτρηση του θώρακα.

    Και οι τρεις μέθοδοι είναι μια σοβαρή χειρουργική επέμβαση και χρησιμοποιούνται συχνότερα στη διαδικασία της εξέλιξης της νόσου.

    Οι εργαστηριακές εξετάσεις περιλαμβάνουν:

    • Ανάλυση πτυέλων για το βακίλο του φυματιδίου.
    • Μικροσκοπική εξέταση.
    • Διάγνωση της φυματίωσης από PCR

    Τι είναι η διάγνωση PCR;

    Μία από τις πιο προηγμένες μεθόδους εργαστηριακής διάγνωσης ειδικών λοιμώξεων καλεί αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης.

    Αυτή η μέθοδος αναπτύχθηκε από τον διάσημο Αμερικανό επιστήμονα Carrie Mullis το 1983, για τον οποίο κέρδισε το βραβείο Νόμπελ.

    Η ανάλυση PCR είναι η απομόνωση σωματιδίων DNA από πτύελα, αίμα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, κόπρανα κλπ. για την επακόλουθη βιοσύνθεση τους.

    Με τη βοήθεια μιας σύνθετης μοριακής γενετικής μελέτης, προσδιορίζεται η φύση των μικροβίων στο σώμα του ασθενούς.

    Αυτό το είδος ανάλυσης για τη φυματίωση πραγματοποιείται σε διάφορα στάδια:

    • Πρώτον, λαμβάνονται βιολογικά δείγματα. Τα υλικά τοποθετούνται σε ειδικά δοχεία και αποστέλλονται στο εργαστήριο.
    • Στο ερευνητικό κέντρο, οι αναλύσεις θερμαίνονται στους 97 βαθμούς. Αυτό καθιστά δυνατή την καταστροφή της δομής του γονιδιώματος του DNA των μικροοργανισμών, που αποτελείται από αρκετές αλυσίδες.
    • Η θερμοκρασία μειώνεται ειδικά έτσι ώστε οι εκκινητές (οι συμμετέχοντες στο DNA από τους οποίους αρχίζει η διαδικασία βιοσύνθεσης) να μπορούν να συνδεθούν με οποιαδήποτε αλυσίδα δεοξυριβονουκλεϊνικού οξέος.
    • Μετά από αυτό, πραγματοποιείται η βιοσύνθεση των μορίων που απαιτούνται για την ανίχνευση.

    Μετά από 25-30 επαναλαμβανόμενους κύκλους στη διαδικασία της εργαστηριακής έρευνας, οι γιατροί έχουν την ευκαιρία να αναγνωρίσουν αν υπάρχουν μολυσματικοί μικροοργανισμοί στο σώμα του ασθενούς ή όχι.

    Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα

    Η PCR για τη φυματίωση είναι η πλέον σύγχρονη διαγνωστική τεχνική. Η μέθοδος καθιστά δυνατή την ανίχνευση της μόλυνσης σε οποιοδήποτε στάδιο με υψηλή αξιοπιστία. Οφέλη:

    • Ταχύτητα - η μελέτη δεν διαρκεί περισσότερο από πέντε ώρες. Τα αποτελέσματα της δοκιμής για τα μικρόβια φυματίωσης μπορούν να βρεθούν μέσα σε 24 ώρες.
    • Η μέθοδος ασφάλειας - PCR δεν έχει αντενδείξεις ηλικίας.
    • Η επικαιρότητα - αυτή η τεχνική σας επιτρέπει να εντοπίσετε τη φυματίωση σε εκείνα τα στάδια, όταν η ασθένεια δεν έχει συμπτώματα.
    • Υψηλός βαθμός ακρίβειας - αν υπάρχουν λίγοι μικροοργανισμοί στις αναλύσεις, θα βρεθούν χρησιμοποιώντας αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης. Επίσης, αυτή η τεχνική καθιστά δυνατή την εύκολη αναγνώριση του αιτιολογικού παράγοντα της φυματίωσης.
    • Ευελιξία - η διάγνωση χρησιμοποιείται όχι μόνο για την ανίχνευση της κατανάλωσης, αλλά και για άλλες ασθένειες όπως χλαμύδια, γονόρροια κ.λπ.

    Παρά τα πολλά πλεονεκτήματα, η χρήση αυτής της τεχνικής στην εγχώρια ιατρική πρακτική είναι η εξαίρεση παρά ο κανόνας. Υπάρχουν πολλοί λόγοι για αυτό.

    Τα μειονεκτήματα αυτής της μεθόδου είναι:

    • Το υψηλό κόστος της έρευνας.
    • Η μέθοδος δεν είναι κατάλληλη για όσους έχουν υποβληθεί σε θεραπεία, καθώς η παρουσία νεκρών βακτηρίων Koch μπορεί να οδηγήσει σε ψευδώς θετικό αποτέλεσμα.
    • Στην περίπτωση μετάλλαξης μολυσματικών μικροοργανισμών, το γονιδίωμα τους δεν μπορεί να αναγνωριστεί κάνοντας ένα ψευδές συμπέρασμα.
    • Είναι σημαντικό να επιλέξετε το σωστό περιβάλλον ανίχνευσης. Για παράδειγμα, το αποτέλεσμα μιας δοκιμασίας αίματος για PCR για φυματίωση (είσοδος αραίωσης) θα είναι αρνητικό εάν το νευρικό σύστημα μολυνθεί.
    • Δεν είναι πάντοτε δυνατή η εφαρμογή αυτής της μεθόδου σε ασθενείς που έχουν διαγνωστεί με πνευμονικές αλλοιώσεις.

    Επιπλέον, μια τέτοια ανάλυση για τη φυματίωση απαιτεί σύγχρονο εξοπλισμό που το 90 τοις εκατό των νοσοκομείων δεν έχει. Στο CIS, μια τέτοια ανάλυση μπορεί να πραγματοποιηθεί από το δίκτυο των κλινικών της Invitro.

    Όροι ανάλυσης

    Οι συστάσεις για ασθενείς που υποβάλλονται σε μια τέτοια δοκιμή φυματίωσης ποικίλλουν ανάλογα με τον τύπο της ανάλυσης που περνούν.

    Όταν λαμβάνετε αίμα για PCR, είναι απαραίτητο να αποφύγετε το κάπνισμα μία ώρα πριν από τη διαδικασία, για να σταματήσετε να παίρνετε αλκοολούχα ποτά και λιπαρά τρόφιμα.

    Συνιστάται επίσης να αποφύγετε σωματική άσκηση, είναι επίσης αδύνατο να τραβήξετε αίμα για φυματίωση με άδειο στομάχι.

    Όταν παίρνετε ένα στυλό από το στόμα και τη ρινική κοιλότητα, δεν μπορείτε να φάτε 2-4 ώρες πριν τη διαδικασία, διαφορετικά δεν θα είναι ενημερωτικό. Επίσης, μην πίνετε αλκοόλ.

    Για ακριβείς αναγνώσεις απαγορεύεται να καπνίζετε νωρίτερα από μία ώρα πριν από τη διαδικασία. Την παραμονή, αποφύγετε να βουρτσίζετε τα δόντια σας και χρησιμοποιώντας σπρέι και σπρέι στο στόμα.

    Εάν υποπτεύεστε ότι υπάρχει φυματίωση του ουρογεννητικού συστήματος, ο ασθενής για 2-3 ημέρες πριν από την παράδοση πρέπει να αποκλείσει το σεξ, για 2-3 ώρες πριν από τη διαδικασία, μην πάτε στην τουαλέτα "με μικρό τρόπο". Τα γεννητικά όργανα πρέπει να πλένονται με καθαρό νερό χωρίς ειδικά μέσα.

    Οι γυναίκες συνιστώνται να μην χρησιμοποιούν κολπικά δισκία, κεριά, μπάλες και επίσης να αποφεύγουν τις δοκιμές σε κρίσιμες ημέρες.

    5 ημέρες πριν από την παράδοση, το αποτέλεσμα είναι απαραίτητο να εγκαταλείψουμε τη διαδικασία της κολποσκόπησης, καθώς και το transvaginal υπερηχογράφημα,

    Πότε χρησιμοποιείται διάγνωση PCR;

    Όχι σε κάθε κλινική υπάρχει τόσο πολύπλοκη διάγνωση, αλλά οι γιατροί προσφεύγουν όλο και περισσότερο σε τέτοιες μεθόδους έρευνας. Συνήθως, αυτή η ανάλυση πραγματοποιείται σε ειδικές περιπτώσεις.

    • Σε περίπτωση αμφίβολων αποτελεσμάτων της μάντης, μπορεί να χρησιμοποιηθεί μια εξέταση αίματος για φυματίωση.
    • Σε περιπτώσεις όπου ο ασθενής έρχεται σε επαφή με μολυσμένο άτομο, ο θεράπων ιατρός δεν μπορεί να προσδιορίσει με ακρίβεια τη διάγνωση.
    • Σε περίπτωση χειρουργικής επέμβασης έκτακτης ανάγκης, όταν είναι απαραίτητο να διαπιστώσετε σε σύντομο χρονικό διάστημα αν ο ασθενής έχει αυτή τη λοίμωξη.
    • Όταν ένας ασθενής είναι έγκυος, όταν άλλες μέθοδοι έρευνας δεν είναι αρκετά ασφαλείς για ένα νεογέννητο μωρό.

    Πρέπει να σημειωθεί ότι αυτή η διάγνωση συνιστάται για παιδιά λόγω της ασφάλειάς της.

    Εάν ένας σπουδαστής έχει αντενδείξεις κατά της δοκιμασίας φυματίωσης, μπορεί να λάβει μια εξέταση αίματος για φυματίωση αντί για μανδύα με PCR.

    Ανάλυση PCR για τη φυματίωση

    Η ανάλυση PCR για τη φυματίωση είναι η πιο δημοφιλής μεταξύ της ιατρικής έρευνας στον τομέα αυτής της ασθένειας.

    Αλλά πώς να προειδοποιήσετε τον εαυτό σας και τους αγαπημένους σας από αυτή τη φοβερή ασθένεια; Πώς να περάσετε τις απαραίτητες δοκιμές για PCR;

    Τα συμπτώματα της φυματίωσης και η πρόληψή της

    Οι ειδικοί λένε ότι περίπου το 30% του συνολικού πληθυσμού πάσχει από φυματίωση.

    Το υψηλότερο ποσοστό της ασθένειας αναπτύσσεται σε υποανάπτυκτες χώρες. Αυτό συμβαίνει συχνότερα ως αποτέλεσμα της μειωμένης ανοσίας στον άνθρωπο.

    Η ασθένεια είναι μία από τις παλαιότερες. Αυτή η ασθένεια μπορεί να βρεθεί στην επένδυση του εγκεφάλου, στην πεπτική οδό, στις αρθρώσεις και στη σπονδυλική στήλη, στο ουροποιητικό σύστημα και σε μικρές περιοχές στο ανθρώπινο δέρμα.

    Οι ειδικοί προσδιορίζουν πιο εύκολα το δέρμα που επηρεάζεται. Στην περιοχή υπάρχουν μικρές σφραγίδες, οι οποίες με την πάροδο του χρόνου αυξάνονται σε μέγεθος, ξεσπούν με λευκόχρυσο υγρό.

    Ο αιτιολογικός παράγοντας της φυματίωσης μπορεί να πάρει τις περισσότερες φορές όταν μιλάει σε έναν άρρωστο, όταν βήχει ή φταρνεύει. Συνήθως, η ασθένεια προχωρεί χωρίς συμπτώματα ή έχει ανοιχτή μορφή, αλλά η διάγνωση της φυματίωσης με PCR επιτρέπει την ανίχνευσή της σε πρώιμα στάδια και σε περιπτώσεις έκτακτης ανάγκης.

    Συμπτώματα της νόσου: παρατεταμένος υγρός βήχας, πυρετός, ρίγη, υπερβολική εφίδρωση τη νύχτα, απότομη απώλεια βάρους, αίσθημα κούρασης και αδυναμίας.

    Η ανοικτή μορφή της νόσου είναι η πιο επικίνδυνη. Ένα άτομο που πάσχει από φυματίωση είναι σε θέση να μολύνει υγιείς ανθρώπους.

    Το πιο σημαντικό σύμπτωμα της πνευμονικής νόσου είναι η αιμόπτυση. Εμφανίζεται σε οποιαδήποτε μορφή της νόσου.

    Σε ορισμένες περιπτώσεις, αυτό μπορεί να οδηγήσει σε αιμορραγία από τους πνεύμονες ενός ατόμου. Είναι πολύ επικίνδυνο και απαιτεί επείγουσα ιατρική παρέμβαση.

    Για την πρόληψη και αναγνώριση της φυματίωσης, οι ειδικοί συνταγογραφούν: ένα δείγμα - τεστ φυματίωσης, εξέταση βιολογικού υλικού, φθοριογραφία, ακτίνες Χ και εξέταση αίματος, πτύελα ή σάλιο.

    Διάγνωση της νόσου

    Βελτιωμένη διάγνωση της νόσου - αυτό είναι το σωστό και κατά τη διάρκεια της θεραπείας ξεκίνησε. Στις περισσότερες περιπτώσεις, οι συνήθεις μέθοδοι ανίχνευσης παθογόνων δεν έχουν πάντοτε αποτέλεσμα και είναι ήδη ξεπερασμένες.

    Ο σημαντικότερος τρόπος για τον εντοπισμό και τη διάγνωση της πνευμονικής νόσου είναι οι ιατρικές εξετάσεις. Συνήθως χρησιμοποιείτε διάγνωση PCR. Αυτή η έρευνα ανακαλύφθηκε πρόσφατα, το 1983, από τον Αμερικανό βιοχημικό Mullis.

    Η δοκιμή σε έναν ασθενή με πνευμονική φυματίωση εκτελείται αποκλειστικά σε ειδικές περιπτώσεις, όταν είναι δύσκολο να καθοριστεί η διάγνωση ή είναι αδύνατο να ανιχνευθεί η ασθένεια με οργανικό τρόπο.

    Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης είναι μια αξιόπιστη μέθοδος PCR. Αυτή η ανάλυση καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό του αιτιολογικού παράγοντα του πόσο είναι στα υγρά του αίματος, των ούρων και του νωτιαίου μυελού. Μια τέτοια ιατρική εξέταση είναι η ασφαλέστερη.

    Η ανάλυση PCR δίνει 100% αποτέλεσμα.

    Έχει υψηλή ευαισθησία, που βοηθά στην αναγνώριση της νόσου για πρώτη φορά μετά από τη μόλυνση, πριν εμφανιστούν τα συμπτώματα της νόσου. Αυτή η μέθοδος ανάλυσης δίνει το αποτέλεσμα μέσα σε λίγες ώρες μετά την παράδοση του βιολογικού υλικού. Η σπορά αυτής της ανάλυσης εκτελείται τρεις φορές, αλλά η αναρρόφηση του άρρωστου στομάχου πραγματοποιείται μόνο στο νοσοκομείο.

    Για την εξακρίβωση των αποτελεσμάτων αναπτύχθηκαν τρία κριτήρια: υψηλή ακρίβεια, ευαισθησία έως 90%, ειδικότητα.

    Η δοκιμή για PCR χρησιμοποιείται σε ορισμένες περιπτώσεις:

    1. για τη διάγνωση της πνευμονικής φυματίωσης.
    2. να καθορίσει την πηγή της ασθένειας ·
    3. ορισμός του εξωπνευμονικού εντοπισμού;
    4. διάγνωση επανεμφάνισης.

    Αξιολογεί το αποτέλεσμα, και να συνταγογραφήσει τη σωστή ιατρική περίθαλψη, μπορεί μόνο ένας ειδικός. Είναι πολύ σημαντικό να αναθέσουμε το σωστό σχήμα ιατρικής θεραπείας για την ανίχνευση της φυματίωσης, είναι απαραίτητο να διεξαχθεί μια δοκιμή για την ευαισθησία του παθογόνου για τις συσκευές κατά της φυματίωσης.

    Μια ποικιλία ιατρικών εξετάσεων φυματίωσης

    Μπορείτε να κάνετε την απαραίτητη ανάλυση με δύο τρόπους: να πάρετε αίμα ή σάλιο από ένα άτομο ή να πάρετε ένα πτύελο.

    Οι εξετάσεις αίματος με PCR μπορούν να είναι δύο τύπων: ELISA και PCR. Μια τέτοια μελέτη βοηθά στην παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της ιατρικής περίθαλψης.

    Μια μέθοδος ELISA βοηθά στην εύρεση αντισωμάτων στο ανθρώπινο σώμα που αντιστέκονται στα μικρόβια φυματίωσης. Η μελέτη αυτή διεξάγεται μία φορά την ημέρα. Το κύριο μειονέκτημα είναι η χαμηλή ευαισθησία του, η οποία επιτρέπει τον προσδιορισμό μόνο μιας νόσου με χαμηλό επίπεδο μόλυνσης.

    Η πιο δημοφιλής και αποτελεσματική έρευνα είναι η ανάλυση του mycobacterium tuberculosis. Με αυτήν, οι γιατροί μπορούν εύκολα να βρουν το DNA των βακτηρίων στο ανθρώπινο αίμα. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται επίσης για τον προσδιορισμό του αριθμού των βακτηρίων, για τον έλεγχο της θεραπείας του ασθενούς, για την ανίχνευση της πρώιμης υποτροπής.

    Το σάλιο PCR είναι μία από τις πιο προηγμένες μεθόδους έρευνας. Μια τέτοια ανάλυση θα βοηθήσει στον εντοπισμό μολυσματικών βακτηριδίων στο σάλιο. Η χρήση PCR αυξάνει τον αριθμό των θραυσμάτων DNA των επιβλαβών μικροβίων.

    Η μέθοδος καλλιέργειας προορίζεται για την εξέταση ανθρώπινων πτυέλων, για την ανίχνευση μικροβακτηρίων.

    Προετοιμασία για έλεγχο PCR

    Προσοχή, χρειάζεστε τη σωστή προετοιμασία του σάλιου για PCR. Εάν δεν τηρούνται όλες οι οδηγίες, η ανάλυση μπορεί να είναι λανθασμένη.

    Πριν από τη λήψη της δοκιμής, απαγορεύεται να καπνίζετε, να παίρνετε τρόφιμα και φάρμακα, καθώς και να καταναλώνετε αλκοόλ για 12 ώρες. Απαγορεύεται να βουρτσίζετε τα δόντια σας, δεν μπορείτε να χρησιμοποιήσετε λαμπρυντικό, αποσμητικό στο στόμα και οδοντικό νήμα.

    Απαγορεύεται να χρησιμοποιείτε κραγιόν και να μπαίνετε σε στενές σχέσεις. Επιτρέπεται να ξεπλύνετε το στόμα σας με απλό βρασμένο νερό.

    Η εξέταση αυτή θα βοηθήσει στην ταυτοποίηση: έρπης, χλαμύδια, φυματίωση, παθογόνα της πνευμονίας, ογκοϊοί, μπαρόληση, μονοπυρήνωση, HIV, ηπατίτιδα πάσης φύσεως, ερυθρά.

    Η ανάλυση για τα μυκοβακτηρίδια πραγματοποιείται κυρίως σε αμφιλεγόμενες περιπτώσεις, δηλαδή εάν είναι δύσκολη η διάγνωση ή υπήρξε επαφή με έναν ασθενή με φυματίωση, πριν ξεκινήσει η επέμβαση, για να ανιχνευθεί η ασθένεια. Χρησιμοποιείται για εξέταση μιας εγκύου γυναίκας, δεδομένου ότι αυτή η μέθοδος είναι η ασφαλέστερη για τη μητέρα και το έμβρυο.

    Μερικές φορές η ανάλυση πραγματοποιείται σε ιδιωτική κλινική, καθώς ο ασθενής δεν συμμορφώθηκε με τους κανόνες για τη δοκιμή, αλλά ταυτόχρονα ανησυχεί για όλα τα συμπτώματα. Η ανάλυση μπορεί να γίνει όταν οι ειδικοί δεν είναι σίγουροι μετά τη διεξαγωγή ενός τεστ Mantoux ή ο ασθενής είναι παιδί.

    Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα των ιατρικών εξετάσεων για τον προσδιορισμό της φυματίωσης

    Η PCR είναι ο πιο δημοφιλής και αποτελεσματικός τρόπος για τον προσδιορισμό της νόσου.

    Η μεγαλύτερη διαφορά από άλλες μελέτες είναι ένα γρήγορο και ακριβές αποτέλεσμα.

    Το πλεονέκτημα αυτής της ιατρικής εξέτασης είναι ότι μπορεί να πραγματοποιηθεί για ουρολογικές, γυναικολογικές, ογκολογικές, λοιμώδεις, αιματολογικές, πνευμονικές, γαστρεντερολογικές και άλλες μελέτες.

    Το κύριο πλεονέκτημα μιας τέτοιας ιατρικής μελέτης είναι ότι οι εξετάσεις αίματος, τα πτύελα και το σάλιο είναι έτοιμα σε σύντομο χρονικό διάστημα (θα χρειαστούν 5 ώρες για να ανιχνευθεί η ασθένεια). Μια τέτοια ιατρική εξέταση επιτρέπει να διεξάγονται δοκιμές όταν ορισμένες μέθοδοι μελέτης μιας ασθένειας απαγορεύονται ή είναι απρόσιτες. Μεγάλη για την ανίχνευση της υποτροπής στους ανθρώπους.

    Χάρη σε αυτή την ανάλυση, κατέστη δυνατή η διεξαγωγή έρευνας για οποιοδήποτε βιολογικό περιβάλλον. Επιτρέπεται η λήψη υλικού από παιδιά. Η PCR καθιστά δυνατό τον εντοπισμό του αιτιολογικού παράγοντα σε οποιοδήποτε στάδιο της ασθένειας. Λόγω της υψηλής ευαισθησίας του, τα μικρόβια μπορούν να βρεθούν ακόμα και αν υπάρχουν λίγα βακτήρια.

    Η μέθοδος PCR επεκτείνει τις δυνατότητές της. Χρησιμοποιείται επίσης για τον προσδιορισμό της πατρότητας, για την κατασκευή νέων γονιδίων, μεταλλάξεων, για τη διέλευση στοιχείων DNA και ούτω καθεξής.

    Τα μειονεκτήματα αυτής της μελέτης είναι μια δαπανηρή μέθοδος έρευνας.

    Μετά από ιατρική θεραπεία, η εξέταση αίματος μπορεί να δείξει την παρουσία ζώντων ή νεκρών παθογόνων μικροοργανισμών σε μικρές ποσότητες, μετά από ιατρική εξέταση, θα δώσει θετικό αποτέλεσμα.

    Τα βακτήρια και τα μικρόβια μπορούν να υποβληθούν σε μετάλλαξη, μετά την οποία η PCR δεν θα μπορέσει να εντοπίσει και να τα αναγνωρίσει, επομένως μόνο ένας ειδικός μπορεί να συνταγογραφήσει μια μελέτη για το απαιτούμενο περιβάλλον, διαφορετικά μια τέτοια ιατρική εξέταση θα είναι αναποτελεσματική.

    Μετά τη δοκιμή, υπάρχει αρνητικό αποτέλεσμα, αλλά αυτό δεν αποκλείει τη δυνατότητα προσβολής ενός ατόμου από φυματίωση. Μια τέτοια ιατρική εξέταση πραγματοποιείται για ασθενείς με σοβαρή πνευμονική νόσο, όταν άλλες μελέτες δεν δίνουν ακριβή αποτελέσματα. Η PCR θα είναι χρήσιμη για άτομα με πνευμονική και εξωπνευμονική φυματίωση.

    Δυστυχώς, ο ιατρικός εξοπλισμός για την ανίχνευση των παθογόνων της φυματίωσης είναι πολύ ακριβός.

    Τα δημόσια νοσοκομεία και οι κλινικές δεν μπορούν να το αντέξουν οικονομικά, αλλά οι κλινικές που πληρώνονται λαμβάνουν εξετάσεις ασθενών και προσφέρουν έτοιμα αποτελέσματα σε σύντομο χρονικό διάστημα.

    Διάγνωση της φυματίωσης από PCR

    Η φυματίωση είναι μια συγκεκριμένη λοίμωξη, η εστία της μπορεί να είναι στους ανθρώπινους ιστούς εδώ και χρόνια και στη συνέχεια να εξαπλωθεί για αρκετούς μήνες. Πρόκειται για μια χρόνια ασθένεια της οποίας τα βέλτιστα θεραπευτικά σχήματα είναι δύσκολο να επιλεγούν. Ένας από τους λόγους για αυτό είναι η καθυστερημένη διάγνωση, όταν τα μυκοβακτηρίδια, ενώ στο ανθρώπινο σώμα, έχουν ήδη προσαρμοστεί σε πολλά φάρμακα.

    Ποιες είναι οι σύγχρονες μέθοδοι διάγνωσης; Διαγνωστικά PCR - τι είναι αυτό; Πώς γίνεται αυτή η έρευνα; Σε ποιες περιπτώσεις διαγιγνώσκεται η φυματίωση με αυτή τη μέθοδο και ποια είναι η ουσία της;

    Τι είναι η διάγνωση PCR

    Αυτή είναι μία από τις πιο σύγχρονες μεθόδους διάγνωσης όχι μόνο ασθενειών, αλλά και η ανίχνευση βιολογικού υλικού. Η διάγνωση της PCR επινοήθηκε σχετικά πρόσφατα. Περίπου 30 χρόνια πριν, το 1983, ένας Αμερικανός βιοχημικός, Carey Banks Mullis, πρότεινε ένα περίπλοκο σχέδιο αποκατάστασης για το βιολογικό υλικό των μικροοργανισμών σε ένα μικρό τμήμα. Χάρη στην ανακάλυψη του, ο επιστήμονας έλαβε το υψηλότερο βραβείο - το βραβείο Νόμπελ.

    Τι είναι αυτό - διάγνωση λοιμώξεων από PCR; Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) είναι μια διάγνωση της ανίχνευσης ιικών ασθενειών, με βάση μεθόδους γενετικής μηχανικής. Χρησιμοποιείται ευρέως στην ιατρική μικροβιολογία, ανοσολογία και ιολογία. Η μέθοδος είναι καθολική και βοηθά στη διάγνωση με μικρή ποσότητα υλικού. Μία λοίμωξη μπορεί να ανιχνευθεί κυριολεκτικά στις πρώτες ώρες μόλυνσης με αυτήν, πολύ πριν εμφανιστούν τα πρώτα συμπτώματα της νόσου.

    Η μέθοδος συνίσταται στην απόκτηση από το υλικό από ένα άρρωστο άτομο όχι το ίδιο το παθογόνο, αλλά θραύσματα του γονιδιώματος (σωματίδια ϋΝΑ), η βιοσύνθεση του με επακόλουθο προσδιορισμό σε ποια κατηγορία μικροοργανισμών ανήκει το γενετικό υλικό που λαμβάνεται μέσω μοριακών γενετικών μεθόδων.

    Παρά το γεγονός ότι πρόκειται για μια περίπλοκη διαδικασία, απαιτείται πολύ λιγότερος χρόνος από πολλές βιολογικές μεθόδους ανίχνευσης μολυσματικών παραγόντων. Μέσα σε λίγες μόνο ώρες, ένας μικροοργανισμός μπορεί να ανιχνευθεί με PCR. Για να γίνει αυτό, δεν υπάρχει ανάγκη να το απομονώσετε από το περιβάλλον (αίμα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, πτύελα) και να το αναπτύξετε για μεγάλο χρονικό διάστημα σε τεχνητά θρεπτικά μέσα. Αρκεί να υπάρχει ένα μικρό κομμάτι του κλώνου DNA του μολυσματικού παράγοντα στο υπό μελέτη υλικό.

    Η βάση της αντίδρασης είναι η δυνατότητα υπό τεχνητές συνθήκες (in vitro) να δημιουργηθεί η σύνθεση μορίων νουκλεϊκού οξέος του μολυσματικού παράγοντα.

    Τι απαιτείται για την PCR;

    1. Οι εκκινητές είναι τα τμήματα ϋΝΑ από τα οποία αρχίζει η βιοσύνθεση ή η δημιουργία.
    2. Νουκλεοτίδια ή σύνθετες ενώσεις που αποτελούν τη βάση ενός μορίου ϋΝΑ ή RNA.
    3. Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης είναι αδύνατη χωρίς την παρουσία πολυμεράσης, η οποία είναι ένα ένζυμο που επιταχύνει την PCR.

    Στάδια διάγνωσης PCR

    Πώς διεξάγεται η μοριακή διάγνωση με PCR; Η διαδικασία είναι απλή και απαιτεί μικρό χρονικό διάστημα, λαμβάνοντας υπόψη τη συλλογή υλικού.

    1. Πριν από την έναρξη της μελέτης, παίρνουν το απαραίτητο βιολογικό υλικό - αυτό είναι το βρογχικό νερό πλυσίματος, το αίμα, το γαστρικό περιεχόμενο, τα πτύελα. Ο τύπος του βιολογικού υλικού εξαρτάται από το ύποπτο παθογόνο.
    2. Μετουσίωση ή καταστροφή της αρχικής δομής του DNA, η οποία αποτελείται από δύο αλυσίδες. Η ουσία αυτού του σταδίου είναι να διαχωριστούν οι δύο αλυσίδες υπό την επίδραση της υψηλής θερμοκρασίας (το μέγιστο είναι 98 ºC, το οποίο διαρκεί όχι περισσότερο από δύο λεπτά).
    3. Στο επόμενο στάδιο PCR, που ονομάζεται ανόπτηση, η θερμοκρασία μειώνεται κατά αρκετούς βαθμούς έτσι ώστε ο εκκινητής να δεσμεύεται στον κλώνο DNA.
    4. Επιμήκυνση, κατά τη διάρκεια της οποίας λαμβάνει χώρα άμεσα η σύνθεση των επιθυμητών μορίων.

    Ως αποτέλεσμα, μόνο 25-30 τέτοιοι κύκλοι λαμβάνουν τον απαραίτητο αριθμό αντιγράφων του DNA των μικροοργανισμών, οι οποίοι είναι εύκολο να αναγνωριστούν.

    Η PCR απαιτεί διάγνωση φυματίωσης;

    Δεν είναι δυνατό για όλα τα άτομα με υποψία φυματίωσης να εκτελέσουν PCR, καθώς η μέθοδος απαιτεί ακριβό εξοπλισμό. Δεν μπορούν όλες οι δημόσιες κλινικές να το αγοράσουν. Επιπλέον, συνέβη το γεγονός ότι οι συνήθεις μέθοδοι διάγνωσης μιας λοίμωξης στις περισσότερες περιπτώσεις δικαιολογούν επίσης τον εαυτό τους.

    Αυτά περιλαμβάνουν:

    • έρευνα ασθενών, ανάληψη ιστορικού.
    • πλήρη εξέταση του προσώπου ·
    • μια μελέτη που χρησιμοποιεί τη δοκιμή φυματίνης Mantoux.
    • ακτινογραφία ή φθοριογραφία.
    • διάγνωση ηλεκτρονικών υπολογιστών εάν είναι απαραίτητο.
    • μεθόδους μικροβιολογικής έρευνας: μικροσκοπία επιφανειών και βακτηριολογική εξέταση πτυέλων.

    Η PCR για τη φυματίωση πραγματοποιείται σε ειδικές περιπτώσεις όταν είναι δύσκολο να γίνει διάγνωση ή δεν είναι δυνατή η πραγματοποίηση άλλων εργαλειολογικών μεθόδων.

    Παρά την πληθώρα των διαγνωστικών μεθόδων, η συχνότητα της φυματίωσης συνεχίζει να αυξάνεται. Επί του παρόντος, δεν υπάρχει μόνο η ανάπτυξή της αλλά και άλλα χαρακτηριστικά:

    • η ασθένεια εμφανίζεται συχνά σε σοβαρή μορφή.
    • ο αριθμός των θανατηφόρων περιπτώσεων αυξάνεται.
    • όλο και πιο ανθεκτικές στη σύγχρονη χημειοθεραπεία διαγιγνώσκονται μορφές της νόσου.

    Η απροθυμία του ίδιου του λαού να υποβληθεί σε τακτικές ιατρικές εξετάσεις ετησίως, η απόρριψη του εμβολιασμού οδηγεί στη διάδοση της φυματίωσης. Σε τέτοιες συνθήκες, χρειαζόμαστε γρήγορες, ενημερωτικές και αποτελεσματικές μεθόδους έρευνας που θα πρέπει να είναι προσιτές σε παιδιά και ενήλικες. Όλες οι παραπάνω διαγνωστικές μέθοδοι είναι πολύ κατώτερες από την PCR.

    Οφέλη της διάγνωσης της φυματίωσης με PCR

    Η έρευνα αυτή, αν και νέα, έχει αποδειχθεί καλά, ειδικά σε αμφιλεγόμενες περιπτώσεις όπου είναι αδύνατο να γίνει διάγνωση για διάφορους λόγους.

    Χάρη στην PCR, είναι πολύ πιο εύκολο να ανιχνευθεί ο αιτιολογικός παράγοντας της φυματίωσης στο υλικό δοκιμής.

    Τα πλεονεκτήματα της διάγνωσης PCR είναι τα ακόλουθα.

    1. Αυτή είναι μια γρήγορη ανάλυση. Ένα μικρό κομμάτι του μορίου ϋΝΑ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να διαγνωστεί σε λίγες μόνο ώρες (περίπου πέντε), το οποίο χρησιμοποιείται με επιτυχία σε καταστάσεις έκτακτης ανάγκης όταν, για παράδειγμα, πριν από μια επιχείρηση είναι απαραίτητο να καθοριστεί αν ένα άτομο είναι άρρωστο με φυματίωση.
    2. Η ανάλυση PCR επιτρέπεται στην περίπτωση που δεν υπάρχουν διαθέσιμες ή απαγορευμένες άλλες μέθοδοι (για την ανίχνευση της πνευμονικής φυματίωσης, μερικές φορές πρέπει να λάβετε αρκετές ακτινογραφικές εικόνες, οι οποίες θα είναι μια μεγάλη δόση ακτινοβολίας).
    3. Με τη βοήθεια της PCR, κάθε βιολογικό περιβάλλον εξετάζεται για την παρουσία παθογόνου σε αυτό. Για παράδειγμα, μπορείτε να πραγματοποιήσετε μια μελέτη του εγκεφαλονωτιαίου υγρού, εάν υπάρχει υποψία φυματιώδους μηνιγγίτιδας.
    4. Επιτρέπεται διάγνωση των μολυσματικών ασθενειών σε παιδιά, διότι η μέθοδος είναι ασφαλής.
    5. Σας επιτρέπει να εντοπίσετε τον παθογόνο σε οποιοδήποτε στάδιο της νόσου.
    6. Η υψηλή ευαισθησία της PCR καθιστά δυνατή την ανίχνευση του Mycobacterium tuberculosis, ακόμη και αν υπάρχουν λίγοι μικροοργανισμοί στο βιολογικό υλικό.
    7. Είναι καλό να πραγματοποιηθεί η διάγνωση της υποτροπής της νόσου.

    Μετά από όλα τα αναγνωσμένα PCR φαίνεται σχεδόν τέλεια διαγνωστική μέθοδος, η οποία θα πρέπει να κάνει όλους με υποψία φυματίωσης. Αλλά υπάρχουν και μειονεκτήματα εδώ, πρέπει να ληφθούν υπόψη.

    Μειονεκτήματα της PCR στη διάγνωση της φυματίωσης

    Στην εποχή μας, τέτοια διαγνωστικά είναι πιο σπάνια από την κανονικότητα. Και γι 'αυτό υπάρχει λόγος.

    1. Αυτή είναι μια ακριβή μέθοδος έρευνας. Σε πολλές κλινικές, ο εξοπλισμός για PCR απουσιάζει λόγω του υψηλού κόστους του, αλλά η ανάλυση μπορεί ακόμα να γίνει σε καταβληθέντα εργαστήρια.
    2. Αμέσως μετά τη θεραπεία, νεκρά μυκοβακτηρίδια ή που ζουν σε μικρές ποσότητες μπορεί να εξακολουθούν να υπάρχουν στο ανθρώπινο σώμα (το αποτέλεσμα θα είναι θετικό κατά τη διάρκεια της διάγνωσης PCR), οπότε η μέθοδος θα είναι αναξιόπιστη αυτή τη στιγμή, δεν έχει νόημα να το εκτελέσει.
    3. Οι μεταλλάξεις των μυκοβακτηρίων οδηγούν σε αναποτελεσματική PCR - μια κανονική ακολουθία κλώνου DNA δεν μπορεί να συντεθεί.
    4. Είναι απαραίτητο να επιλέξουμε το σωστό περιβάλλον για τη μελέτη, το αίμα λαμβάνεται μόνο εάν υπάρχει υποψία ότι είναι μολυσμένο (σηψαιμία), δεν υπάρχει λόγος να πάρουμε πτύελα εάν υπάρχει θέμα φυματίωσης των οργάνων του νευρικού συστήματος. Σε αυτή την περίπτωση, η PCR δεν θα είναι σε θέση να ανιχνεύσει τον παθογόνο παράγοντα και η διάγνωση δεν θα είναι ενημερωτική.

    Ενδείξεις για την ανίχνευση της φυματίωσης χρησιμοποιώντας ανάλυση PCR

    Η διάγνωση της φυματίωσης με PCR γίνεται πιο συχνά σε αμφιλεγόμενες περιπτώσεις. Πότε αναφέρονται οι γιατροί αυτή τη μελέτη;

    1. Εάν είναι δύσκολο να γίνει μια διάγνωση χρησιμοποιώντας τις συνήθεις διαθέσιμες μεθόδους, αλλά υπήρξε επαφή με έναν ασθενή με φυματίωση.
    2. Στην περίπτωση που ένα άτομο δεν μπορεί να παραδοθεί σε κλινική για να υποβληθεί σε συνήθεις εξετάσεις ρουτίνας για φυματίωση, είναι ευκολότερο να τον εξετάσει χρησιμοποιώντας PCR, καθώς τα πτύελα για τη δοκιμασία μπορούν να παραδοθούν σε βάζο και η διάγνωση επιβεβαιώνεται μέσα σε λίγες ώρες.
    3. Αν κάποιος πρόκειται να έχει επείγουσα επέμβαση και είναι επείγον να μάθει εάν είναι άρρωστος με φυματίωση.
    4. Εάν είναι απαραίτητο, μια έγκυος γυναίκα είναι επίσης καλύτερα να εξεταστεί για φυματίωση χρησιμοποιώντας PCR, δεδομένου ότι η μέθοδος είναι ασφαλής.
    5. Με αμειβόμενη βάση, οποιοσδήποτε δεν έχει διαγνωσθεί με φυματίωση έχει επιβεβαιωθεί χρησιμοποιώντας βακτηριολογικές μεθόδους και ακτινοσκόπηση. Αυτό συμβαίνει όταν η βλάβη στους πνεύμονες είναι ανεπαίσθητη στην άμεση εικόνα και το άτομο κατά την παράδοση των πτυέλων για τη μελέτη δεν μπορούσε να ακολουθήσει τις συστάσεις για τη σωστή συλλογή υλικού. Σε αυτή την περίπτωση, το άτομο ανησυχεί για όλα τα συμπτώματα που χαρακτηρίζουν την πνευμονική φυματίωση.
    6. Όταν υπάρχουν αμφιβολίες σχετικά με τα αποτελέσματα του τεστ Mantoux.
    7. Είναι προτιμότερο να γίνει διάγνωση της φυματίωσης από τα παιδιά σε παιδιά. Η διαδικασία είναι ασφαλής, δεν δημιουργεί πρόσθετη έκθεση στην ακτινοβολία και είναι αποτελεσματική στην ανίχνευση των δυσκολιών διάγνωσης των μορφών της ασθένειας.

    Η έγκαιρη διάγνωση της φυματίωσης είναι το κλειδί για τη σωστή συνταγογράφηση της θεραπείας και τη μείωση της εξάπλωσης της νόσου. Συχνά, οι γνωστές μέθοδοι ανίχνευσης ασθενειών δεν είναι πάντοτε αποτελεσματικές. Επομένως, η PCR σήμερα είναι ένας από τους πιο αξιόπιστους και ασφαλείς τρόπους ανίχνευσης της μόλυνσης στα αρχικά στάδια της ανάπτυξής της.