Πώς γίνεται η ανάλυση με PCR: περιγραφή της διαδικασίας

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης είναι γνωστή εδώ και 30 χρόνια. Χρησιμοποιείται ευρέως σε πολλούς τομείς, από την αρχαιολογία έως τη γενετική.

Είναι η μέθοδος PCR που βοηθά στην καθιέρωση της πατρότητας, αλλά συνηθέστερα χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό διαφόρων μολυσματικών ασθενειών στο ανθρώπινο σώμα.

Πώς γίνεται η ανάλυση PCR και τι είναι αυτό; Θα προσπαθήσουμε να απαντήσουμε λεπτομερώς σε αυτές τις ερωτήσεις.

Ανάλυση PCR - τι είναι αυτό;

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) είναι μια μέθοδος ακριβείας μοριακής γενετικής διάγνωσης, η οποία επιτρέπει την ανίχνευση διαφόρων μολυσματικών και κληρονομικών ασθενειών στους ανθρώπους, τόσο στα οξεία όσο και στα χρόνια στάδια, πολύ πριν εμφανιστεί η ασθένεια.

Η μέθοδος PCR είναι απολύτως συγκεκριμένη και εκτελείται σωστά δεν μπορεί να δώσει ψευδή θετικό αποτέλεσμα. Δηλαδή, αν δεν υπάρχει μόλυνση, η ανάλυση δεν θα δείξει ποτέ τι είναι. Επομένως, τώρα είναι πολύ συχνά η έγκριση της διάγνωσης, λαμβάνεται μια πρόσθετη ανάλυση PCR για τον προσδιορισμό του αιτιολογικού παράγοντα και της φύσης του.

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) το 1983, που αναπτύχθηκε από τον Carey Mulllis (ΗΠΑ), για την οποία το 1993 του απονεμήθηκε το Βραβείο Νόμπελ Χημείας.

Ποιο είναι το πλεονέκτημα αυτής της μεθόδου;

Η διάγνωση με αυτή τη μέθοδο επιτρέπει σε κάποιον να βρει το παθογόνο απευθείας στο γονίδιο που περιέχεται στα υπό μελέτη υλικά. Αυτή είναι η πιο ακριβής ανάλυση των λοιμώξεων των γεννητικών οργάνων, των κρυμμένων λοιμώξεων, των διαφόρων σεξουαλικά μεταδιδόμενων ασθενειών.

Διαφορές Η διάγνωση PCR από άλλες μεθόδους εργαστηριακής έρευνας έχει ως εξής:

• η μέθοδος αποσκοπεί στον εντοπισμό του ίδιου του παθογόνου παράγοντα ·
• Η διάγνωση PCR είναι καθολική: για την ανίχνευση αρκετών παθογόνων παραγόντων.
• ασθένειες, αρκεί μόνο ένα βιολογικό δείγμα του ασθενούς.
• η μέθοδος είναι ιδιαίτερα ευαίσθητη και δεν συνοδεύεται από άλλες διασταυρούμενες αντιδράσεις.

Επιπλέον, το πλεονέκτημα της διάγνωσης PCR είναι ότι οποιοδήποτε βιολογικό υλικό του ασθενούς είναι κατάλληλο για ανάλυση: αίμα, εκκρίσεις από τα γεννητικά όργανα, ούρα, σπέρμα.

Ποιες λοιμώξεις μπορεί να αποκαλύψει ένα επίχρισμα στην PCR;

Ένας μεγάλος αριθμός παθογόνων μπορεί να υπάρχουν στο σώμα, συμπεριλαμβανομένων των "κρυφών" αυτών που δεν εκδηλώνονται για μεγάλο χρονικό διάστημα.

Η ανάλυση επίχρισμα σε PCR επιτρέπει να αποκαλύψει τέτοιες λοιμώξεις:

Το υλικό δοκιμής για PCR είναι συνήθως πτύελα, σάλιο, ούρα και αίμα. Πριν από την ανάλυση, πρέπει να προετοιμαστεί προσεκτικά για αυτό, έχοντας λάβει μια προκαταρκτική διαβούλευση με έναν γιατρό.

Το αίμα για PCR χορηγείται συνήθως με άδειο στομάχι. Τα καλά αποτελέσματα δείχνουν ανάλυση όταν το υλικό για τη μελέτη λαμβάνεται από τον αυχενικό σωλήνα ή την ουρήθρα. Στην περίπτωση αυτή, είναι καλύτερο να διεξάγετε διαγνωστικά PCR το αργότερο μία ημέρα μετά την επαφή.

Ποικιλίες PCR

Η PCR χρησιμοποιείται σε πολλές περιοχές για ανάλυση και σε επιστημονικά πειράματα. Υπάρχουν διάφορες μέθοδοι ανάλυσης:

1. Η αντίστροφη μεταγραφή PCR (Reverse Transcription PCR, RT-PCR (English)) χρησιμοποιείται για την ενίσχυση, την απομόνωση ή την αναγνώριση μιας γνωστής αλληλουχίας από μια βιβλιοθήκη RNA.
2. Η αναστροφή της PCR (Inverse PCR (Eng.)) - χρησιμοποιείται όταν είναι γνωστό μόνο ένα μικρό τμήμα στην επιθυμητή αλληλουχία. Αυτή η μέθοδος είναι ιδιαίτερα χρήσιμη όταν είναι απαραίτητο να προσδιοριστούν γειτονικές αλληλουχίες μετά από εισαγωγή DNA στο γονιδίωμα.
3. Εφαρμοσμένη PCR (Nested PCR) χρησιμοποιείται για τη μείωση του αριθμού των υποπροϊόντων αντίδρασης. Χρησιμοποιούνται δύο ζεύγη εκκινητών και διεξάγονται δύο διαδοχικές αντιδράσεις.
4. Ασύμμετρη PCR (ασύμμετρη PCR) πραγματοποιείται όταν είναι απαραίτητο να ενισχυθεί κυρίως μία από τις αλυσίδες του αρχικού DNA. Χρησιμοποιείται σε ορισμένους προσδιορισμούς αλληλούχησης και υβριδισμού.
5. Ποσοτική PCR (Ποσοτική PCR, Q-PCR (Eng.)) Ή PCR σε πραγματικό χρόνο χρησιμοποιείται για την άμεση παρακολούθηση της μέτρησης της ποσότητας ενός συγκεκριμένου προϊόντος PCR σε κάθε κύκλο αντίδρασης.
6. Βήμα PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - χρησιμοποιώντας αυτήν την προσέγγιση μειώνει την επίδραση της μη ειδικής δέσμευσης των εκκινητών.
7. Ομάδες-ειδικές PCR (ομάδα-ειδική PCR) - PCR για σχετικές αλληλουχίες εντός ενός ή μεταξύ διαφορετικών ειδών, χρησιμοποιώντας συντηρητικούς εκκινητές για αυτές τις αλληλουχίες.

Εάν η αλληλουχία νουκλεοτιδίων της μήτρας είναι μερικώς ή άγνωστη, είναι δυνατόν να χρησιμοποιηθούν εκφυλισμένοι εκκινητές, η αλληλουχία των οποίων περιέχει εκφυλισμένες θέσεις στις οποίες μπορούν να εντοπιστούν οποιεσδήποτε βάσεις. Για παράδειγμα, η αλληλουχία εκκινητών μπορεί να είναι:... ATH..., όπου το Η είναι Α, Τ ή C.

Ποια βιολογικά υλικά ερευνούνται;

Το υλικό για μελέτες PCR, στις οποίες μπορεί να ανιχνευθεί ξένο βακτηριακό DNA ή το ϋΝΑ ή RNA του ιού, μπορεί να αποτελείται από διάφορα βιολογικά μέσα και ανθρώπινα υγρά:

1. Ούρα. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη μόλυνση της ουρογεννητικής οδού σε άνδρες και ουρολογικά όργανα σε γυναίκες (σε άνδρες, η χρήση ούρων ως υλικού αντικαθιστά την επιθηλιακή απόξεση).
2. Φλεγμα. Χρησιμοποιείται για τη διάγνωση της φυματίωσης και λιγότερο συχνά για τη διάγνωση αναπνευστικών μορφών χλαμυδίων και μυκοπλάσμωσης. Τα πτύελα σε ποσότητα 15-20 ml συλλέγονται σε αποστειρωμένη (αναλώσιμη) φιάλη.
3. Βιολογικά υγρά. Χυμοί προστάτη, υπεζωκότα, εγκεφαλονωτιαίο, αμνιακό, αρθρικό υγρό, βρογχοκυψελιδική πλύση, σάλιο λαμβάνονται σύμφωνα με τις ενδείξεις.
4. Επιθηλιακά απορρίμματα από βλεννογόνους. Συνήθως χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση των σεξουαλικά μεταδιδόμενων ασθενειών (STD), όπως η γονόρροια, τα χλαμύδια, η μυκοπλάσμωση, η ουρεαπλασμό, η τριχομονάση, η γαρνιρέλη, οι ερπητικές και άλλες λοιμώξεις που επηρεάζουν τους βλεννογόνους.
5. Βιοψίες. Οι πιο συχνά χρησιμοποιούμενες βιοψίες του στομάχου και του δωδεκαδακτύλου για την ταυτοποίηση της λοίμωξης από Helicobacter pylori.
6. Αίμα, πλάσμα, ορός. Χρησιμοποιείται για ανάλυση PCR των ιών ηπατίτιδας Β, C, D, G, έρπη, CMV, HIV, ανθρώπινα γονίδια.

Πώς να προετοιμαστείτε για την ανάλυση;

Η αξιοπιστία του αποτελέσματος PCR εξαρτάται άμεσα από την ορθότητα της παράδοσης υλικού προς εξέταση. Το υλικό δεν πρέπει να μολυνθεί, διαφορετικά το αποτέλεσμα της μελέτης δεν θα είναι αντικειμενικό. Οι πιο σημαντικές συστάσεις πριν από την υποβολή μιας ανάλυσης PCR είναι οι ακόλουθες απαιτήσεις:

1. Τα ούρα παραδίδονται το πρωί σε αποστειρωμένο δοχείο.
2. Μια εξέταση αίματος για τη μόλυνση πρέπει να λαμβάνεται με άδειο στομάχι το πρωί.
3. Δεν είναι απαραίτητο να δείξετε σεξουαλική δραστηριότητα την ημέρα πριν από την ανάλυση.

Το αποτέλεσμα της ανάλυσης θα είναι έτοιμο εντός 1,5-2 ημερών μετά τη διαδικασία. Υπάρχουν περιπτώσεις κατά τις οποίες το αποτέλεσμα μπορεί να ετοιμαστεί την ίδια μέρα.

Αποκωδικοποίηση της ανάλυσης της CRP

Η διαδικασία ερμηνείας της παρουσιαζόμενης έρευνας διακρίνεται από την απλότητα της. Τα αποτελέσματα της ανάλυσης PCR μπορούν να ληφθούν σε 1,5-2x ημέρες μετά την παράδοση του υλικού. Σε ορισμένες περιπτώσεις, το αποτέλεσμα είναι έτοιμο την πρώτη μέρα και αυτό μπορεί να σημαίνει:

• Ένα αρνητικό αποτέλεσμα δείχνει ότι ο μολυσματικός παράγοντας λείπει από το υλικό που διαγνώστηκε.
• Το Pcr θετικό σημαίνει ότι το DNA ή το RNA του παθογόνου υπάρχει στο ανθρώπινο σώμα.

Σε ορισμένες περιπτώσεις, παράγεται ποσοτικός προσδιορισμός μικροοργανισμών. Αυτό ισχύει ιδιαίτερα για ασθένειες που προκαλούνται από ευκαιριακούς μικροοργανισμούς. Δεδομένου ότι τα βακτήρια αυτά δείχνουν την αρνητική τους επίδραση μόνο με υπερβολικά ποσά.

Επίσης, η ποσοτική ανάλυση της PCR είναι σημαντική για την επιλογή των θεραπευτικών τακτικών και για τον έλεγχο της θεραπείας των ιογενών λοιμώξεων όπως ο ιός HIV και ηπατίτιδας.

Πόσο ακριβής είναι η διάγνωση των λοιμώξεων από την PCR;

Η μέθοδος PCR χαρακτηρίζεται από υψηλή ακρίβεια, ειδικότητα και ευαισθησία. Αυτό σημαίνει ότι αυτή η ανάλυση είναι ικανή:

• να προσδιορίσει με ακρίβεια την παρουσία ή την απουσία μόλυνσης.
• να προσδιορίσετε με ακρίβεια το είδος της λοίμωξης (ειδικότητα) ·
• ανίχνευση μόλυνσης ακόμη και με πολύ χαμηλή περιεκτικότητα σε DNA μικροβίων σε βιολογικό υλικό,
• που έχει υποβληθεί σε έρευνα (ευαισθησία).

Ανάλυση PCR: τιμή και χρόνος

Η τιμή μιας συγκεκριμένης ανάλυσης θα εξαρτηθεί από τη μόλυνση που ελέγξατε. Κατά προσέγγιση τιμές και όροι:

1. STI: 300-500 ρούβλια, χρόνος - 1 ημέρα?
2. Ιός Epstein-Barr, ιός ανθρώπινου θηλώματος, ιός έρπη, κυτταρομεγαλοϊός: 300-500 ρούβλια, όροι - 1 ημέρα.
3. Ηπατίτιδα Α, Β, Γ, Δ, Ζ: Ποιοτική ανάλυση 650 ρούβλια, ποσοτική ανάλυση 2000 ρούβλια. Όροι - έως 5 ημέρες.
4. Αντισώματα στον ιό της ηπατίτιδας C, συνολικά (Anti-HCV) - 420 ρούβλια.
5. Αντισώματα στον ιό της ηπατίτιδας C, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 ρούβλια.
6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 ρούβλια, όροι - 1 ημέρα.
7. HIV (αντισώματα και αντιγόνα) - 380 ρούβλια.
8. HIV RNA, ποιοτικά - 3.500 ρούβλια.
9. HIV RNA, ποσοτικά - 11.000 ρούβλια.

Για να εξοικονομήσετε χρήματα, μπορείτε να επιλέξετε μια σταθερή παρτίδα αναλύσεων. Η υπηρεσία αυτή παρέχεται από την πλειονότητα των κλινικών όπου είναι δυνατή η διέλευση της ανάλυσης με τη μέθοδο ERP (invitro, onlinics, κλπ.).

Διάγνωση της φυματίωσης από PCR

Η φυματίωση είναι μια συγκεκριμένη λοίμωξη, η εστία της μπορεί να είναι στους ανθρώπινους ιστούς εδώ και χρόνια και στη συνέχεια να εξαπλωθεί για αρκετούς μήνες. Πρόκειται για μια χρόνια ασθένεια της οποίας τα βέλτιστα θεραπευτικά σχήματα είναι δύσκολο να επιλεγούν. Ένας από τους λόγους για αυτό είναι η καθυστερημένη διάγνωση, όταν τα μυκοβακτηρίδια, ενώ στο ανθρώπινο σώμα, έχουν ήδη προσαρμοστεί σε πολλά φάρμακα.

Ποιες είναι οι σύγχρονες μέθοδοι διάγνωσης; Διαγνωστικά PCR - τι είναι αυτό; Πώς γίνεται αυτή η έρευνα; Σε ποιες περιπτώσεις διαγιγνώσκεται η φυματίωση με αυτή τη μέθοδο και ποια είναι η ουσία της;

Τι είναι η διάγνωση PCR

Αυτή είναι μία από τις πιο σύγχρονες μεθόδους διάγνωσης όχι μόνο ασθενειών, αλλά και η ανίχνευση βιολογικού υλικού. Η διάγνωση της PCR επινοήθηκε σχετικά πρόσφατα. Περίπου 30 χρόνια πριν, το 1983, ένας Αμερικανός βιοχημικός, Carey Banks Mullis, πρότεινε ένα περίπλοκο σχέδιο αποκατάστασης για το βιολογικό υλικό των μικροοργανισμών σε ένα μικρό τμήμα. Χάρη στην ανακάλυψη του, ο επιστήμονας έλαβε το υψηλότερο βραβείο - το βραβείο Νόμπελ.

Τι είναι αυτό - διάγνωση λοιμώξεων από PCR; Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) είναι μια διάγνωση της ανίχνευσης ιικών ασθενειών, με βάση μεθόδους γενετικής μηχανικής. Χρησιμοποιείται ευρέως στην ιατρική μικροβιολογία, ανοσολογία και ιολογία. Η μέθοδος είναι καθολική και βοηθά στη διάγνωση με μικρή ποσότητα υλικού. Μία λοίμωξη μπορεί να ανιχνευθεί κυριολεκτικά στις πρώτες ώρες μόλυνσης με αυτήν, πολύ πριν εμφανιστούν τα πρώτα συμπτώματα της νόσου.

Η μέθοδος συνίσταται στην απόκτηση από το υλικό από ένα άρρωστο άτομο όχι το ίδιο το παθογόνο, αλλά θραύσματα του γονιδιώματος (σωματίδια ϋΝΑ), η βιοσύνθεση του με επακόλουθο προσδιορισμό σε ποια κατηγορία μικροοργανισμών ανήκει το γενετικό υλικό που λαμβάνεται μέσω μοριακών γενετικών μεθόδων.

Παρά το γεγονός ότι πρόκειται για μια περίπλοκη διαδικασία, απαιτείται πολύ λιγότερος χρόνος από πολλές βιολογικές μεθόδους ανίχνευσης μολυσματικών παραγόντων. Μέσα σε λίγες μόνο ώρες, ένας μικροοργανισμός μπορεί να ανιχνευθεί με PCR. Για να γίνει αυτό, δεν υπάρχει ανάγκη να το απομονώσετε από το περιβάλλον (αίμα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, πτύελα) και να το αναπτύξετε για μεγάλο χρονικό διάστημα σε τεχνητά θρεπτικά μέσα. Αρκεί να υπάρχει ένα μικρό κομμάτι του κλώνου DNA του μολυσματικού παράγοντα στο υπό μελέτη υλικό.

Η βάση της αντίδρασης είναι η δυνατότητα υπό τεχνητές συνθήκες (in vitro) να δημιουργηθεί η σύνθεση μορίων νουκλεϊκού οξέος του μολυσματικού παράγοντα.

Τι απαιτείται για την PCR;

1. Οι εκκινητές είναι τα τμήματα ϋΝΑ από τα οποία αρχίζει η βιοσύνθεση ή η δημιουργία.
2. Νουκλεοτίδια ή σύνθετες ενώσεις που αποτελούν τη βάση ενός μορίου ϋΝΑ ή RNA.
3. Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης είναι αδύνατη χωρίς την παρουσία πολυμεράσης, η οποία είναι ένα ένζυμο που επιταχύνει την PCR.

Στάδια διάγνωσης PCR

Πώς διεξάγεται η μοριακή διάγνωση με PCR; Η διαδικασία είναι απλή και απαιτεί μικρό χρονικό διάστημα, λαμβάνοντας υπόψη τη συλλογή υλικού.

1. Πριν από την έναρξη της μελέτης, παίρνουν το απαραίτητο βιολογικό υλικό - αυτό είναι το βρογχικό νερό πλυσίματος, το αίμα, το γαστρικό περιεχόμενο, τα πτύελα. Ο τύπος του βιολογικού υλικού εξαρτάται από το ύποπτο παθογόνο.
2. Μετουσίωση ή καταστροφή της αρχικής δομής του DNA, η οποία αποτελείται από δύο αλυσίδες. Η ουσία αυτού του σταδίου είναι να διαχωριστούν οι δύο αλυσίδες υπό την επίδραση της υψηλής θερμοκρασίας (το μέγιστο είναι 98 ºC, το οποίο διαρκεί όχι περισσότερο από δύο λεπτά).
3. Στο επόμενο στάδιο PCR, που ονομάζεται ανόπτηση, η θερμοκρασία μειώνεται κατά αρκετούς βαθμούς έτσι ώστε ο εκκινητής να δεσμεύεται στον κλώνο DNA.
4. Επιμήκυνση, κατά τη διάρκεια της οποίας λαμβάνει χώρα άμεσα η σύνθεση των επιθυμητών μορίων.

Ως αποτέλεσμα, μόνο 25-30 τέτοιοι κύκλοι λαμβάνουν τον απαραίτητο αριθμό αντιγράφων του DNA των μικροοργανισμών, οι οποίοι είναι εύκολο να αναγνωριστούν.

Η PCR απαιτεί διάγνωση φυματίωσης;

Δεν είναι δυνατό για όλα τα άτομα με υποψία φυματίωσης να εκτελέσουν PCR, καθώς η μέθοδος απαιτεί ακριβό εξοπλισμό. Δεν μπορούν όλες οι δημόσιες κλινικές να το αγοράσουν. Επιπλέον, συνέβη το γεγονός ότι οι συνήθεις μέθοδοι διάγνωσης μιας λοίμωξης στις περισσότερες περιπτώσεις δικαιολογούν επίσης τον εαυτό τους.

Αυτά περιλαμβάνουν:

• έρευνα ασθενών, ανάληψη ιστορικού.
• πλήρη εξέταση του προσώπου ·
• μια μελέτη που χρησιμοποιεί τη δοκιμή φυματίνης Mantoux.
• ακτινογραφία ή φθοριογραφία.
• διάγνωση ηλεκτρονικών υπολογιστών εάν είναι απαραίτητο.
• μεθόδους μικροβιολογικής έρευνας: μικροσκοπία επιφανειών και βακτηριολογική εξέταση πτυέλων.

Η PCR για τη φυματίωση πραγματοποιείται σε ειδικές περιπτώσεις όταν είναι δύσκολο να γίνει διάγνωση ή δεν είναι δυνατή η πραγματοποίηση άλλων εργαλειολογικών μεθόδων.

Παρά την πληθώρα των διαγνωστικών μεθόδων, η συχνότητα της φυματίωσης συνεχίζει να αυξάνεται. Επί του παρόντος, δεν υπάρχει μόνο η ανάπτυξή της αλλά και άλλα χαρακτηριστικά:

• η ασθένεια εμφανίζεται συχνά σε σοβαρή μορφή.
• ο αριθμός των θανατηφόρων περιπτώσεων αυξάνεται.
• όλο και πιο ανθεκτικές στη σύγχρονη χημειοθεραπεία διαγιγνώσκονται μορφές της νόσου.

Η απροθυμία του ίδιου του λαού να υποβληθεί σε τακτικές ιατρικές εξετάσεις ετησίως, η απόρριψη του εμβολιασμού οδηγεί στη διάδοση της φυματίωσης. Σε τέτοιες συνθήκες, χρειαζόμαστε γρήγορες, ενημερωτικές και αποτελεσματικές μεθόδους έρευνας που θα πρέπει να είναι προσιτές σε παιδιά και ενήλικες. Όλες οι παραπάνω διαγνωστικές μέθοδοι είναι πολύ κατώτερες από την PCR.

Οφέλη της διάγνωσης της φυματίωσης με PCR

Η έρευνα αυτή, αν και νέα, έχει αποδειχθεί καλά, ειδικά σε αμφιλεγόμενες περιπτώσεις όπου είναι αδύνατο να γίνει διάγνωση για διάφορους λόγους.

Χάρη στην PCR, είναι πολύ πιο εύκολο να ανιχνευθεί ο αιτιολογικός παράγοντας της φυματίωσης στο υλικό δοκιμής.

Τα πλεονεκτήματα της διάγνωσης PCR είναι τα ακόλουθα.

1. Αυτή είναι μια γρήγορη ανάλυση. Ένα μικρό κομμάτι του μορίου ϋΝΑ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να διαγνωστεί σε λίγες μόνο ώρες (περίπου πέντε), το οποίο χρησιμοποιείται με επιτυχία σε καταστάσεις έκτακτης ανάγκης όταν, για παράδειγμα, πριν από μια επιχείρηση είναι απαραίτητο να καθοριστεί αν ένα άτομο είναι άρρωστο με φυματίωση.
2. Η ανάλυση PCR επιτρέπεται στην περίπτωση που δεν υπάρχουν διαθέσιμες ή απαγορευμένες άλλες μέθοδοι (για την ανίχνευση της πνευμονικής φυματίωσης, μερικές φορές πρέπει να λάβετε αρκετές ακτινογραφικές εικόνες, οι οποίες θα είναι μια μεγάλη δόση ακτινοβολίας).
3. Με τη βοήθεια της PCR, κάθε βιολογικό περιβάλλον εξετάζεται για την παρουσία παθογόνου σε αυτό. Για παράδειγμα, μπορείτε να πραγματοποιήσετε μια μελέτη του εγκεφαλονωτιαίου υγρού, εάν υπάρχει υποψία φυματιώδους μηνιγγίτιδας.
4. Επιτρέπεται διάγνωση των μολυσματικών ασθενειών σε παιδιά, διότι η μέθοδος είναι ασφαλής.
5. Σας επιτρέπει να εντοπίσετε τον παθογόνο σε οποιοδήποτε στάδιο της νόσου.
6. Η υψηλή ευαισθησία της PCR καθιστά δυνατή την ανίχνευση του Mycobacterium tuberculosis, ακόμη και αν υπάρχουν λίγοι μικροοργανισμοί στο βιολογικό υλικό.
7. Είναι καλό να πραγματοποιηθεί η διάγνωση της υποτροπής της νόσου.

Μετά από όλα τα αναγνωσμένα PCR φαίνεται σχεδόν τέλεια διαγνωστική μέθοδος, η οποία θα πρέπει να κάνει όλους με υποψία φυματίωσης. Αλλά υπάρχουν και μειονεκτήματα εδώ, πρέπει να ληφθούν υπόψη.

Μειονεκτήματα της PCR στη διάγνωση της φυματίωσης

Στην εποχή μας, τέτοια διαγνωστικά είναι πιο σπάνια από την κανονικότητα. Και γι 'αυτό υπάρχει λόγος.

1. Αυτή είναι μια ακριβή μέθοδος έρευνας. Σε πολλές κλινικές, ο εξοπλισμός για PCR απουσιάζει λόγω του υψηλού κόστους του, αλλά η ανάλυση μπορεί ακόμα να γίνει σε καταβληθέντα εργαστήρια.
2. Αμέσως μετά τη θεραπεία, νεκρά μυκοβακτηρίδια ή που ζουν σε μικρές ποσότητες μπορεί να εξακολουθούν να υπάρχουν στο ανθρώπινο σώμα (το αποτέλεσμα θα είναι θετικό κατά τη διάρκεια της διάγνωσης PCR), οπότε η μέθοδος θα είναι αναξιόπιστη αυτή τη στιγμή, δεν έχει νόημα να το εκτελέσει.
3. Οι μεταλλάξεις των μυκοβακτηρίων οδηγούν σε αναποτελεσματική PCR - μια κανονική ακολουθία κλώνου DNA δεν μπορεί να συντεθεί.
4. Είναι απαραίτητο να επιλέξουμε το σωστό περιβάλλον για τη μελέτη, το αίμα λαμβάνεται μόνο εάν υπάρχει υποψία ότι είναι μολυσμένο (σηψαιμία), δεν υπάρχει λόγος να πάρουμε πτύελα εάν υπάρχει θέμα φυματίωσης των οργάνων του νευρικού συστήματος. Σε αυτή την περίπτωση, η PCR δεν θα είναι σε θέση να ανιχνεύσει τον παθογόνο παράγοντα και η διάγνωση δεν θα είναι ενημερωτική.

Ενδείξεις για την ανίχνευση της φυματίωσης χρησιμοποιώντας ανάλυση PCR

Η διάγνωση της φυματίωσης με PCR γίνεται πιο συχνά σε αμφιλεγόμενες περιπτώσεις. Πότε αναφέρονται οι γιατροί αυτή τη μελέτη;

1. Εάν είναι δύσκολο να γίνει μια διάγνωση χρησιμοποιώντας τις συνήθεις διαθέσιμες μεθόδους, αλλά υπήρξε επαφή με έναν ασθενή με φυματίωση.
2. Στην περίπτωση που ένα άτομο δεν μπορεί να παραδοθεί σε κλινική για να υποβληθεί σε συνήθεις εξετάσεις ρουτίνας για φυματίωση, είναι ευκολότερο να τον εξετάσει χρησιμοποιώντας PCR, καθώς τα πτύελα για τη δοκιμασία μπορούν να παραδοθούν σε βάζο και η διάγνωση επιβεβαιώνεται μέσα σε λίγες ώρες.
3. Αν κάποιος πρόκειται να έχει επείγουσα επέμβαση και είναι επείγον να μάθει εάν είναι άρρωστος με φυματίωση.
4. Εάν είναι απαραίτητο, μια έγκυος γυναίκα είναι επίσης καλύτερα να εξεταστεί για φυματίωση χρησιμοποιώντας PCR, δεδομένου ότι η μέθοδος είναι ασφαλής.
5. Με αμειβόμενη βάση, οποιοσδήποτε δεν έχει διαγνωσθεί με φυματίωση έχει επιβεβαιωθεί χρησιμοποιώντας βακτηριολογικές μεθόδους και ακτινοσκόπηση. Αυτό συμβαίνει όταν η βλάβη στους πνεύμονες είναι ανεπαίσθητη στην άμεση εικόνα και το άτομο κατά την παράδοση των πτυέλων για τη μελέτη δεν μπορούσε να ακολουθήσει τις συστάσεις για τη σωστή συλλογή υλικού. Σε αυτή την περίπτωση, το άτομο ανησυχεί για όλα τα συμπτώματα που χαρακτηρίζουν την πνευμονική φυματίωση.
6. Όταν υπάρχουν αμφιβολίες σχετικά με τα αποτελέσματα του τεστ Mantoux.
7. Είναι προτιμότερο να γίνει διάγνωση της φυματίωσης από τα παιδιά σε παιδιά. Η διαδικασία είναι ασφαλής, δεν δημιουργεί πρόσθετη έκθεση στην ακτινοβολία και είναι αποτελεσματική στην ανίχνευση των δυσκολιών διάγνωσης των μορφών της ασθένειας.

Η έγκαιρη διάγνωση της φυματίωσης είναι το κλειδί για τη σωστή συνταγογράφηση της θεραπείας και τη μείωση της εξάπλωσης της νόσου. Συχνά, οι γνωστές μέθοδοι ανίχνευσης ασθενειών δεν είναι πάντοτε αποτελεσματικές. Επομένως, η PCR σήμερα είναι ένας από τους πιο αξιόπιστους και ασφαλείς τρόπους ανίχνευσης της μόλυνσης στα αρχικά στάδια της ανάπτυξής της.

Ανάλυση PCR

Η PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης) είναι μακράν η ταχύτερη και πιο αξιόπιστη μέθοδος για τη διάγνωση μολυσματικών ασθενειών.

Η αρχή της μεθόδου αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης αναπτύχθηκε από τον Kary Mullis το 1983. Για την ανακάλυψή του, ο Κ. Mullis έλαβε το 1993 το βραβείο Νόμπελ Χημείας.

Η μέθοδος PCR επιτρέπει την επίτευξη σημαντικής αύξησης σε μικρές συγκεντρώσεις ορισμένων θραυσμάτων νουκλεϊκού οξέος (DNA) σε βιολογικό υλικό (δείγμα). Η μέθοδος βασίζεται σε πολλαπλή επιλεκτική αντιγραφή (ενίσχυση) συγκεκριμένου τμήματος DNA που χρησιμοποιεί ένζυμα υπό τεχνητές συνθήκες.

Τα πλεονεκτήματα της διαγνωστικής μεθόδου PCR ως διαγνωστικής μεθόδου για τις μολυσματικές ασθένειες

Άμεση ανίχνευση παθογόνων παραγόντων

Πολλές παραδοσιακές διαγνωστικές μέθοδοι, όπως η ανοσολογική δοκιμασία ενζύμων, ανιχνεύουν δείκτες πρωτεϊνών που είναι τα προϊόντα ζωτικής δραστηριότητας των μολυσματικών παραγόντων, γεγονός που δίνει μόνο έμμεσες ενδείξεις για την παρουσία μολύνσεων. Η αναγνώριση μιας ειδικής περιοχής DNA του παθογόνου με PCR παρέχει μια άμεση ένδειξη της παρουσίας του παθογόνου.

Υψηλή εξειδίκευση

Η υψηλή εξειδίκευση της μεθόδου PCR οφείλεται στο γεγονός ότι ένα μοναδικό θραύσμα ϋΝΑ ανιχνεύεται στο υπό μελέτη υλικό. Η εξειδίκευση προσδιορίζεται από την αλληλουχία νουκλεοτιδίων των εκκινητών, η οποία αποκλείει τη δυνατότητα απόκτησης ψευδών αποτελεσμάτων, σε αντίθεση με τις ανοσολογικές μεθόδους ανάλυσης, όπου τα σφάλματα σε σχέση με αντιγόνα διασταυρούμενης αντίδρασης είναι συχνά.

Υψηλή ευαισθησία

Η μέθοδος PCR επιτρέπει την ανίχνευση ακόμη και μεμονωμένων κυττάρων βακτηρίων ή ιών. Η ανάλυση PCR αποκαλύπτει την παρουσία παθογόνων μολυσματικών ασθενειών σε περιπτώσεις όπου άλλες μέθοδοι (ανοσολογικές, βακτηριολογικές, μικροσκοπικές) δεν μπορούν να κάνουν αυτό. Η ευαισθησία της ανάλυσης PCR είναι 10-100 κύτταρα ανά δείγμα (η ευαισθησία των ανοσολογικών και μικροσκοπικών εξετάσεων είναι 103-105 κύτταρα).

Η καθολικότητα της διαδικασίας ανίχνευσης διαφόρων παθογόνων

Το υλικό για τη μελέτη με PCR είναι το DNA του παθογόνου. Η μέθοδος βασίζεται στην ανίχνευση ενός θραύσματος DNA ή ενός RNA που είναι ειδικό για έναν συγκεκριμένο οργανισμό. Η ομοιότητα της χημικής σύνθεσης όλων των νουκλεϊκών οξέων επιτρέπει τη χρήση ενοποιημένων μεθόδων εργαστηριακής έρευνας. Αυτό καθιστά δυνατή τη διάγνωση διαφόρων παθογόνων από μία βιολογική δοκιμασία.

Υψηλό ποσοστό του αποτελέσματος της ανάλυσης

Για την ανάλυση PCR, δεν απαιτείται απομόνωση και καλλιέργεια της καλλιέργειας του παθογόνου, κάτι που απαιτεί πολύ χρόνο. Η ενοποιημένη μέθοδος επεξεργασίας του βιοϋλικού υλικού και η ανίχνευση προϊόντων αντίδρασης και η αυτοματοποίηση της διαδικασίας ενίσχυσης επιτρέπουν την πραγματοποίηση πλήρους ανάλυσης σε 4-5 ώρες.

Η δυνατότητα διάγνωσης όχι μόνο οξείας αλλά και λανθάνουσας μολύνσεως

Η μέθοδος PCR είναι ιδιαίτερα αποτελεσματική για τη διάγνωση δύσκολων προς καλλιέργεια, μη καλλιεργημένων και επίμονων μορφών μικροοργανισμών που συχνά συναντώνται σε λανθάνοντες και χρόνιες λοιμώξεις, καθώς αυτή η μέθοδος αποφεύγει τις δυσκολίες που σχετίζονται με την ανάπτυξη τέτοιων μικροοργανισμών στο εργαστήριο. Η χρήση της διάγνωσης PCR είναι επίσης πολύ αποτελεσματική έναντι παθογόνων με υψηλή αντιγονική μεταβλητότητα και ενδοκυτταρικά παράσιτα.

Πόσο αποτελεσματική είναι η εξέταση των πτυέλων για φυματίωση με PCR;

Για τον εντοπισμό των κολλητών Koch σε ανθρώπους, χρησιμοποιούνται διαφορετικές διαγνωστικές μέθοδοι. Χάρη σε αυτόν, η παθολογία μπορεί να ανιχνευθεί ακόμα και στο αρχικό στάδιο, γεγονός που αυξάνει τις πιθανότητες για ανάκτηση του ασθενούς. Η ανάλυση των πτυέλων για τη φυματίωση είναι μια τεχνική που εκτιμάται περισσότερο και είναι αρκετά αποτελεσματική. Τι είναι και πόσο κοστίζει μια τέτοια ανάλυση;

Ποια είναι η ανάλυση των πτυέλων με PCR;

Η PCR σημαίνει αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης. Αυτή η μέθοδος είναι αποτελεσματική κατά των μολυσματικών ασθενειών. Για να καθορίσετε μια σαφή διάγνωση, δεν χρειάζεται να συλλέγετε μια μεγάλη ποσότητα βιοϋλικών και να περιμένετε πολύς χρόνος, όπως στην περίπτωση της σποράς-σποράς.

Η μέθοδος βασίζεται στην απόκτηση ϋΝΑ σωματιδίων μικροοργανισμών. Περαιτέρω, η μοριακή γενετική έρευνα θα καθορίσει ποιος τύπος μικροοργανισμών θα πρέπει να περιλαμβάνει το διαθέσιμο υλικό. Κάτω από συνθήκες δοκιμαστικού σωλήνα, ένας ειδικός θα συνθέσει μόρια βακτηρίων και θα κάνει τα κατάλληλα συμπεράσματα σε λίγες ώρες.

Αποτελεσματικότητα

Η ανάλυση των πτυέλων για το Mycobacterium tuberculosis είναι αποτελεσματική όταν το ραβδί του Koch χτύπησε το αναπνευστικό σύστημα. Σε αυτή την περίπτωση, η ασθένεια μπορεί να αναγνωριστεί εύκολα, ακόμη και στις πρώτες ώρες της μόλυνσης.

Όμως, η ανάλυση των πτυέλων δεν θα παρουσιάσει αξιόπιστο αποτέλεσμα εάν υπάρχει φυματίωση:

• οστά.
• εγκέφαλος, νωτιαίος μυελός.
• νευρικό σύστημα ·
• αρθρώσεις κλπ.

Ο φθισιολόγος θα είναι σε θέση να προσδιορίσει τον τύπο της νόσου, λαμβάνοντας υπόψη τα σημερινά συμπτώματα και βασιζόμενη στα αποτελέσματα γενικών και άλλων αναλύσεων.

Είναι επίσης ακατάλληλο για μια τέτοια μέθοδο έρευνας στην περίπτωση που πρέπει να εκτελέσετε μια ανάλυση ελέγχου μετά τη θεραπευτική αγωγή της ασθένειας. Το αποτέλεσμα θα είναι θετικό, όπως και στο σώμα, σε κάθε περίπτωση, υπάρχουν ακόμη ζωντανά ή νεκρά IBC. Είναι προτιμότερο να προτιμάτε άλλη διαγνωστική διαδικασία.

Αντενδείξεις στη μέθοδο

Ως εκ τούτου, δεν υπάρχουν αντενδείξεις για τον έλεγχο των πτυέλων για φυματίωση χρησιμοποιώντας PCR. Υπάρχουν περιορισμοί. Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, δεν υπάρχει λόγος να διεξαχθεί μετά τη θεραπεία της φυματίωσης. Τα αποτελέσματα δεν θα είναι χρήσιμα. Εδώ είναι επιθυμητό να καταφύγουμε σε μια διαφορετική διάγνωση.

Επιπλέον, δεν υπάρχουν άλλα εμπόδια για τη διάγνωση αυτή. Τα πτύελα μπορούν να εξεταστούν σε οποιαδήποτε ηλικιακή κατηγορία και για οποιεσδήποτε σχετικές ασθένειες. Ακόμη και αν δεν υπάρχει άφθονη απελευθέρωση πτύων, η ανάλυση μπορεί να γίνει με τη λήψη βλεννογόνου χρησιμοποιώντας βρογχοσκόπηση.

Οφέλη

Σε αυτή τη μέθοδο, η μάζα των συν πληρώσεων, περιλαμβάνουν:

1. Υψηλή εξειδίκευση και ευαισθησία. Μόνο ο αιτιολογικός παράγοντας της φυματίωσης ανιχνεύεται. Δεν μπορεί να υπάρξει ψευδή απάντηση εάν ληφθούν υπόψη όλες οι αποχρώσεις της διαδικασίας. Τα μυκοβακτηρίδια ανιχνεύονται ακόμη και όταν ο ελάχιστος αριθμός τους. Ακόμα και αν υπάρχουν 10 μη φυσιολογικά κύτταρα στο συλλεγμένο υλικό, η μόλυνση θα ανιχνευθεί.
2. Η ταχύτητα της απάντησης. Πόση ανάλυση γίνεται; Μετά από 3-5 ώρες μπορείτε να πάρετε το αποτέλεσμα. Δεν υπάρχει λόγος να κάνουμε καλλιέργεια πτυέλων για τη φυματίωση, και αυτό μειώνει τον χρόνο.
3. Μπορείτε να αναγνωρίσετε ως κρυμμένη λοίμωξη και αυτή που είναι σε οξεία μορφή.
4. Δεν υπάρχουν απόλυτες αντενδείξεις. Αυτό καθιστά δυνατή τη διεξαγωγή της διαδικασίας για όλους χωρίς εξαίρεση (ακόμη και για μικρά παιδιά), και ειδικά όταν δεν έχουν λυθεί άλλες μέθοδοι.
5. Με τη βοήθεια της διάγνωσης PCR, μελετάται ένα διαφορετικό βιολογικό υλικό (ούρα, κόπρανα, αίμα, σάλιο, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, κλπ.).
6. Η μέθοδος αποκαλύπτει τη φυματίωση στα πρώτα στάδια, στις πρώτες ώρες μετά τη μόλυνση.

στο περιεχόμενο ↑

Μειονεκτήματα

Εκτός από τις θετικές πλευρές, υπάρχουν και αρνητικές. Αυτό είναι:

1. Η ανάλυση PCR είναι μια ακριβή "ευχαρίστηση". Επιπλέον, ο εξοπλισμός που είναι απαραίτητος για την εφαρμογή του δεν είναι διαθέσιμος σε κάθε ιατρικό κέντρο. Στις κλινικές είναι σπάνια παρούσα, καθώς η αξία του είναι επίσης μεγάλη. Αν μιλάμε για ιδιωτικές κλινικές, τότε ναι, μπορείτε να βρείτε αυτό το είδος διάγνωσης. Αφήστε τον εαυτό σας, δυστυχώς, δεν μπορεί όλοι.
2. Εμφανίζει ένα ψευδώς θετικό αποτέλεσμα σε εκείνους τους ανθρώπους που έχουν πρόσφατα υποβληθεί σε θεραπεία φυματίωσης.
3. Εάν μεταβληθεί το MBC, η μέθοδος μπορεί επίσης να δώσει ψευδή αποτελέσματα.
4. Εάν το υλικό συλλέγεται λανθασμένα ή ο ειδικός που διεξάγει την έρευνα έχει ανεπαρκές επίπεδο ικανοτήτων, τότε είναι δυνατή και δυσλειτουργία. Σε ορισμένες περιπτώσεις, η διαδικασία θα πρέπει να επαναληφθεί αρκετές φορές και κάθε φορά που η πληρωμή επαναλαμβάνεται.

στο περιεχόμενο ↑

Προετοιμασία για ανάλυση

Προκειμένου το υλικό να είναι υψηλής ποιότητας, πρέπει να συναρμολογηθεί σωστά και να προετοιμαστεί κατάλληλα για αυτό.

Υπάρχουν ορισμένοι κανόνες για τη συλλογή πτυέλων για τη φυματίωση. Ο αλγόριθμος δράσης έχει ως εξής:

1. Ακόμα και την παραμονή, το βράδυ ένα άτομο πρέπει να πιει έναν αποχρεμπτικό (αν ο πτύελος απομακρυνθεί άσχημα). Ακόμα κι αν δεν βοηθούσε, η εισπνοή θα πρέπει να πραγματοποιείται με βάση φαρμακευτικό φάρμακο αραίωσης και αποβολής. Ελλείψει πτύελου, ο ασθενής στοχεύει στη βρογχοσκόπηση. Κατά τη διάρκεια αυτής της διαδικασίας λαμβάνεται το υλικό για τη μελέτη.
2. Αγοράστε ένα ειδικό δοχείο εκ των προτέρων. Είναι αποστειρωμένο και αεροστεγές, οπότε δεν υπάρχει τίποτα επιπλέον που να μπορεί να τοποθετηθεί εκεί, καθώς και να ανοίγει εκ των προτέρων.
3. Το δωμάτιο όπου θα συλλεγούν τα πτύελα πρέπει να αερίζεται καλά. Είναι απαραίτητο να ανοίξετε τα παράθυρα, τις πόρτες και να ανοίξετε την κουκούλα. Μια άλλη καλή επιλογή είναι να πάρετε λίγο φρέσκο ​​αέρα (για παράδειγμα, στο μπαλκόνι ή στην αυλή).
4. Αμέσως πριν από τη διαδικασία, θα πρέπει να προειδοποιήσετε όλους, ώστε να μην μπαίνει κανείς στο δωμάτιο όπου θα συμβούν τα πάντα. Δεν πρέπει να υπάρχουν επιπλέον μικροσωματίδια στο βιοϋλικό - αυτό είναι σημαντικό.
5. Δεν συνιστάται φαγητό πριν από τη συλλογή.
6. Το πλύσιμο στο στόμα και στο λαιμό.
7. Το σάλιο ξεσηκώνεται. Η χωρητικότητά του θα πρέπει να είναι ελάχιστη.
8. Με βήχα, ένα άτομο παίρνει το φλέγμα έξω και το φτύει σε ένα παρασκευασμένο δοχείο. Μετά τη διαδικασία, κλείστε καλά το καπάκι και ρίξτε το δείγμα στο εργαστήριο.

Πώς να συλλέξετε τα πτύελα πρέπει να ενημερώσετε το γιατρό. Εάν ο ασθενής δεν τολμά να το κάνει μόνο του, τότε οι εργαζόμενοι στον τομέα της υγείας έρχονται στη διάσωση. Κατά τη διάρκεια της χειραγώγησης, έβαλαν μια ειδική μάσκα προστασίας. Συλλέξτε τα πτύελα θα βρίσκονται σε ένα ειδικό δωμάτιο, όπου δεν υπάρχει τρόπος για τους ξένους. Εάν ο ασθενής δεν μπορεί να έρθει στην κλινική, ο ειδικός έρχεται στο σπίτι του και βοηθά στη συλλογή της βλέννας.

Εάν γίνει βρογχοσκόπηση, τότε ο ασθενής εγχέεται στην τραχεία με μια συσκευή - ένα βρογχοσκόπιο. Με τη βοήθειά του λαμβάνεται το υλικό.

Για λόγους αξιοπιστίας, είναι σκόπιμο να περάσει η ανάλυση τρεις φορές, δηλαδή:

• το πρωί με άδειο στομάχι.
• μετά την πρώτη φορά μετά από 4-5 ώρες.
• 24 ώρες μετά την πρώτη μελέτη και επίσης πριν από τα γεύματα.

στο περιεχόμενο ↑

Πώς γίνεται αυτή η ανάλυση;

Η μετάβαση σε εξέταση πτυέλων για φυματίωση είναι μόνο μέρος της εργασίας. Κύριο μπροστά. Πολλά εξαρτώνται από το πόσο προετοιμασμένος ένας ειδικός.

Η πορεία της μελέτης έχει ως εξής:

1. Ο ειδικός προχωρά στην καταστροφή της πρωταρχικής δομής του DNA (μετουσίωση). Υπάρχουν δύο αλυσίδες εδώ. Σε υψηλές θερμοκρασίες, διαχωρίζονται.
2. Στο επόμενο στάδιο, η θερμοκρασία μειώνεται (ανόπτηση). Αυτό είναι απαραίτητο για τη σύνδεση του κλώνου DNA με τον εκκινητή.
3. Το τρίτο στάδιο είναι η επιμήκυνση. Εδώ συντίθενται τα απαραίτητα μόρια.

στο περιεχόμενο ↑

Αποκωδικοποίηση αποτελεσμάτων

Το Mycobacterium tuberculosis στα πτύελα με PCR μπορεί να ανιχνευθεί ή όχι. Ένα θετικό αποτέλεσμα βασίζεται στο γεγονός ότι υπάρχει Koch stick DNA στο βιοϋλικό. Αυτό υποδηλώνει ότι το άτομο είναι μολυσμένο. Με ένα αρνητικό - 98% από το γεγονός ότι το θέμα δεν είναι μολυσμένο.

Οι δείκτες μπορούν να κριθούν σε:

• ποια φάση της παθολογίας (λανθάνουσα ή ενεργή)?
• Πόσο επηρεάζεται το σώμα.
• αν η επιλεγείσα θεραπεία είναι αποτελεσματική σε μια συγκεκριμένη περίπτωση.

Λάβετε υπόψη ότι τίποτα δεν είναι λεπτομερές. Ως εκ τούτου, ενδέχεται να υπάρχει ένα ψευδώς θετικό ή ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα. Προκειμένου να διασφαλιστεί η ορθότητά του, συνιστώνται άλλες διαγνωστικές διαδικασίες ή διεξάγεται PCR δύο φορές (τρεις φορές).

Ανάλυση κόστους σε διάφορα κέντρα

Μπορείτε να δώσετε πτύελα για PCR σε διαφορετικές κλινικές. Ας δώσουμε παραδείγματα πολλών δημοφιλών κέντρων της Μόσχας με πολιτικές τιμολόγησης.

Μέθοδοι για την εξέταση των πτυέλων για τη φυματίωση

Η ανάλυση των πτυέλων για τη φυματίωση περιλαμβάνεται στη σειρά των διαγνωστικών μέτρων που απαιτούνται για τον εντοπισμό και την αποσαφήνιση της διάγνωσης. Η περιεκτικότητα σε πτύελα θα βοηθήσει στην πραγματοποίηση ενός κατάλληλου θεραπευτικού σχήματος.

Πώς να περάσετε μια εξέταση πτυέλων για φυματίωση

Οι γιατροί έχουν αναπτύξει κανόνες για τη διεξαγωγή της ανάλυσης. Το σάλιο συλλέγεται το πρωί, πριν το πρωινό του προσώπου. Πρώτον, ο ασθενής εκτελεί διαδικασίες υγιεινής:

• ο καθαρισμός των δοντιών των δοντιών.
• λεπτομερή έκπλυση με καθαρό νερό της στοματικής κοιλότητας και του φάρυγγα.

Στη συνέχεια αρχίζει η άμεση παράδοση υλικού για ανάλυση. Πώς να περάσει μια εξέταση πτυέλων; Απαιτήσεις για τη διαδικασία:

1. Η προετοιμασία ξεκινά εκ των προτέρων το βράδυ. Ο ασθενής ενθαρρύνεται να λάβει ειδικά φάρμακα που θα κάνουν την πνευμονική έκκριση πιο φυσική. Πρόκειται για αποχρεμπτικές και αραιωτικές ενώσεις. Αν αυτές οι διαδικασίες δεν βοηθούν, πραγματοποιήστε εισπνοή με μια φαρμακευτική σύνθεση για αποχρωματισμό.
2. Προετοιμάστε τα δοχεία για τα πτύελα. Η βλέννα πρέπει να συλλέγεται σε αποστειρωμένα πιάτα, κλείνοντας σφιχτά, σφιχτά.
3. Πριν από την παράδοση, βγείτε και φτύστε σε ένα δοχείο. Ο όγκος του σάλιου δεν πρέπει να είναι μεγάλος, απαιτεί πτύελα από τον λάρυγγα. Τα βακτήρια της στοματικής κοιλότητας είναι εξωγενή στην ανάλυση.
4. Συλλέξτε το σάλιο σε ένα δωμάτιο με εξαιρετικό αερισμό. Η ανάλυση διεξάγεται ανοίγοντας το τραβέρσα, τρέχοντας την κουκούλα. Συνιστάται να ανοίξετε τα παράθυρα ή να βγείτε στον καθαρό αέρα.

Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας στην αίθουσα απαγορεύεται να εισέλθει. Οι εξωτερικοί συνεργάτες μπορούν να συμβάλουν στη μικροχλωρίδα του γραφείου και, συνεπώς, στα πτύελα, παθολογικούς σχηματισμούς. Οι ιατροί λαμβάνουν ανάλυση σε ειδική μάσκα (αναπνευστήρα).

Ανάλυση πτυέλων για μεταγραφή φυματίωσης

Η αποκωδικοποίηση αρχίζει με την εξέταση της εμφάνισης της βλέννας. Η παθολογία χαρακτηρίζει την αλλαγή χρώματος - γίνεται σκοτεινή, με ορατά ανάμεικτα αίματος. Το χρώμα δεν είναι ο κύριος δείκτης. Το πτύελο γίνεται σκοτεινό από το ποτό του κόκκινου κρασιού, το πάθος του καφέ. Ορισμένα φάρμακα και έγχρωμα ποτά αλλάζουν την εμφάνιση της βλέννας.

Το υλικό που συλλέγεται αποκρυπτογραφείται από δύο δείκτες, δηλαδή οι γιατροί παίρνουν δύο αποτελέσματα:

Θετική απάντηση

Η ανάλυση του προκύπτοντος πτυέλου επιβεβαιώνει την παρουσία της νόσου στο σώμα. Ποιο επιβεβαιώνει αυτό:

• ξένη ύλη ή άγνωστες εγκλείσεις.
• την παρουσία θρόμβων βλέννας.
• ορατές ραβδώσεις.
• δυσάρεστη πυώδη ή μολυσματική οσμή.
• ποντίκι.

Η μέθοδος μακροσκοπικής έρευνας παρέχει και άλλα δεδομένα:

• ινώδεις συσπάσεις.
• Koch σχηματισμούς ραβδί φακών?
• προϊόντα από την αποσύνθεση αποσύνθεσης των βακτηριακών ουσιών.
• υπολείμματα της παθολογικής διαδικασίας στον πνευμονικό ιστό.

Ένα θετικό αποτέλεσμα αποκαλύπτει μια αυξημένη ποσότητα πρωτεϊνικών ενώσεων. Φτάνει τα 100-120g / l.

Μια άλλη μικροσκοπική μέθοδος καθιστά δυνατή την αναγνώριση άλλων επικίνδυνων στοιχείων:

• κυψελιδικά μακροφάγα.
• υπερεκτιμημένη σύνθεση των λευκοκυττάρων.
• υψηλό ποσοστό λεμφοκυττάρων.

Για τη φυματίωση, ένα άτομο προσπαθεί συχνά να φτύνει από το στόμα του. Η αιμόπτυση αυξάνει τον σχηματισμό των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Ο όγκος του σάλιου στο στόμα είναι τέτοιος που ένα άτομο δεν μπορεί να το καταπιεί χωρίς να το παρατηρήσει. Του περισσότερο από σε μια υγιή κατάσταση.

Αρνητική απάντηση

Η μελέτη δείχνει ότι ο αριθμός των λευκοκυττάρων είναι μικρός, αντιστοιχεί στον κανονικό. Μικροβακτηρίδια επίσης δεν ανιχνεύονται. Εάν ο ασθενής αισθάνεται ότι δεν είναι υγιής, τότε ο ειδικός θα συνταγογραφήσει μια πρόσθετη εξέταση. Είναι πιθανό η ασθένεια να σχετίζεται με πνευμονική νόσο. Οι τύποι και οι μέθοδοι επιπρόσθετης διάγνωσης εξαρτώνται από τα συμπτώματα και την κατάσταση του ασθενούς.

Πώς είναι η μελέτη της βλέννας

Η φυματίωση είναι μια επικίνδυνη παθολογική επίδραση στον πνευμονικό ιστό, παρατηρείται η αποσύνθεσή τους. Η ανάλυση πραγματοποιείται με διάφορες μεθόδους. Η πιο κοινή - ELISA (ανοσολογική δοκιμή). Η ουσία της μεθόδου:

1. Αντισώματα προστίθενται στο διάλυμα στο οποίο τοποθετείται τμήμα του πτυέλου.
2. Ελέγξτε τη συγκέντρωση των αντιγόνων, σε σύγκριση με τον κανόνα ενός υγιούς σώματος.
3. Προσδιορίστε τη δραστηριότητα του παθολογικού περιβάλλοντος.
4. Διαγνώστε.

Η δεύτερη έκδοση της εργαστηριακής έρευνας είναι ΑΠΟΒΛΗΤΑ. Για τη μέθοδο λαμβάνετε ειδικό ιατρικό εξοπλισμό. Η ουσία της έρευνας υλικού:

1. Στο μικροπεριβάλλον που εγχύεται με πτύελα για τον επιδιωκόμενο τύπο μόλυνσης.
2. Η συσκευή αρχίζει να αναπτύσσεται σε ορισμένες θερμοκρασιακές καταστάσεις βακτηρίων.
3. Το διοξείδιο του άνθρακα παράγεται κατά τη διαδικασία, και οι αισθητήρες το παραλαμβάνουν.
4. Το αέριο συνδυάζεται με τη βαφή.
5. Στον δείκτη φθορισμού εξάγονται συμπεράσματα σχετικά με τον τύπο της ασθένειας.

Ο ευκολότερος τρόπος είναι πολιτιστικός. Phlegm σπαρμένο σε ένα ιδιαίτερο περιβάλλον. Ο γιατρός εξετάζει τους τύπους αποικιών μικροβιακών σχηματισμών. Η μέθοδος είναι η μεγαλύτερη, αλλά σας επιτρέπει να αποδείξετε τη διάγνωση. Χρησιμοποιείται πολύ σπάνια, ακριβώς λόγω μιας μεγάλης χρονικής περιόδου, η οποία δεν είναι πάντα κατάλληλη για τον ασθενή.

Ανάλυση του πτύελου pcr για τη φυματίωση

Η PCR είναι συντομογραφία της ιατρικής αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης. Η διάγνωση είναι μια από τις τελευταίες εξελίξεις των επιστημόνων. Άνοιξε το 1983, η σημασία της ανακάλυψης εκτιμάται στον κόσμο, ο επιστήμονας έλαβε την υψηλότερη αναγνώριση - το βραβείο Νόμπελ.

Η μέθοδος βασίζεται στη χρήση της γενετικής μηχανικής. Η ευελιξία του στην ανάγκη για μια μικρή ποσότητα υλικού για ακριβή διάγνωση. Ο εντοπισμός της λοίμωξης από τη φυματίωση είναι πραγματικά στις πρώτες ώρες της μόλυνσης, χωρίς να περιμένουμε την ανάπτυξη της νόσου.

Η ουσία της μεθόδου που είναι η πολυμεράση:

• ένας ασθενής παίρνει ένα θραύσμα σωματιδίων ϋΝΑ.
• διεξάγει τη βιολογική σύνθεση του υλικού.
• που καθορίζεται από την κατηγορία των μικροοργανισμών.

Η διαδικασία είναι τεχνολογικά πολύπλοκη, περιλαμβάνει μοριακή γενετική εξέταση. Η PCR για τη φυματίωση παίρνει κυριολεκτικά λίγες ώρες. Ο χρόνος που απαιτείται για άλλες μεθόδους δεν μπορεί να συγκριθεί με αυτόν σε ταχύτητα. Αφού περάσει η ανάλυση, ο ασθενής περιμένει την ανίχνευση του αιτιολογικού παράγοντα. Η διαδικασία που βασίζεται μόνο σε έναν ειδικό μπορεί να καταλάβει. Ένας συνηθισμένος άνθρωπος δεν καταλαβαίνει τις πολυπλοκότητες της μεθόδου.

Πώς γίνεται η διάγνωση των εξετάσεων φυματίωσης:

1. Πάρτε το απαραίτητο υλικό για ανάλυση. Τι θα μπορούσε να είναι: αίμα, στομάχι, πτύελα, νερό, πλυμένα με βρόγχους.
2. Ο τύπος του υλικού επιλέγεται ανάλογα με τον τύπο της πιθανής μολύνσεως του παθογόνου παράγοντα.
3. Το επόμενο βήμα είναι να μελετήσετε τη σύνδεση της αλυσίδας. Δύο αλυσίδες υποβάλλονται σε υψηλές θερμοκρασίες έως και 98 μοίρες. Το στάδιο ονομάζεται μετουσίωση (καταστροφή της δομικής αλυσίδας DNA). Χρόνος έκθεσης σε θερμοκρασία - έως 2 λεπτά.
4. Το επόμενο στάδιο είναι η ανόπτηση. Η θερμοκρασία μειώνεται, ο εκκινητής επιτρέπεται να συνδεθεί στον κλώνο DNA.
5. Ως αποτέλεσμα, λαμβάνει χώρα επιμήκυνση - η σύνθεση των μορίων που είναι απαραίτητα για τη διαδικασία.

Για μια τέτοια ανάλυση απαιτείται ειδικός εξοπλισμός. Είναι ακριβό, οπότε δεν είναι διαθέσιμο σε καμία μονάδα υγειονομικής περίθαλψης. Η PCR διεξάγεται σε δύσκολες περιπτώσεις, όταν δεν υπάρχει ακριβές αποτέλεσμα των συμβατικών διαγνωστικών μεθόδων, είναι αδύνατο να πραγματοποιηθούν οργανολογικές μέθοδοι ελέγχου της κατάστασης του ασθενούς.

Τα πλεονεκτήματα της τεχνολογίας PCR:

1. Η ταχύτητα απόκτησης του αποτελέσματος. Περίπου 5 ώρες ο γιατρός έχει ακριβή δεδομένα. Αυτή η ταχύτητα σάς επιτρέπει να βοηθήσετε τον ασθενή σε περίπτωση έκτακτης ανάγκης. Πιο συχνά, είναι η προεγχειρητική περίοδος.
2. Επιτρέπεται όταν δεν είναι δυνατή η χρήση άλλων μεθόδων. Για παράδειγμα, η συχνή επανάληψη των ακτίνων Χ οδηγεί σε ακτινοβολία. Η PCR δεν είναι επικίνδυνη για τον ασθενή.
3. Μπορείτε να εξερευνήσετε οποιοδήποτε βιολογικό περιβάλλον. Ακόμη και οι πολύπλοκες μορφές φυματίωσης εντοπίζονται.
4. Η μέθοδος είναι ασφαλής, επομένως, κατάλληλη για παιδιά.
5. Η μόλυνση ανιχνεύεται σε οποιοδήποτε στάδιο.
6. Η PCR δεν επιτρέπει την απόκρυψη ακόμη και ενός μικρού αριθμού βακτηριακών μικροσωματιδίων.
7. Κατάλληλο για τον έλεγχο πιθανής υποτροπής της φυματίωσης.

Πόσο κάνει ανάλυση πτυέλων για τη φυματίωση

Τα δείγματα λαμβάνονται περισσότερες από μία φορές. Οι επαναλήψεις αποκλείουν τη δυνατότητα σφαλμάτων ή τη λήψη υλικού κακής ποιότητας που δεν αντικατοπτρίζει την πραγματική θέση και την κατάσταση του ασθενούς. Πόσες φορές συλλέγετε πτύελα, ενημερώστε τον θεράποντα ιατρό. Η καλύτερη επιλογή είναι τρεις φορές την ημέρα. Μερικές φορές μπορεί να απαιτούνται επιπλέον δείγματα. Σε ποια χρονικά διαστήματα συλλέγουν:

1. Πριν το φαγητό το πρωί.
2. 3-4 ώρες μετά την πρώτη δοκιμή.
3. Τη δεύτερη ημέρα, επίσης πριν από τα γεύματα.

Η φυματίωση είναι μια επικίνδυνη ασθένεια που μπορεί να επηρεάσει το σώμα κάθε ατόμου. Υπάρχουν πολλές καταστάσεις μόλυνσης. Με κάθε υποψία της πιθανότητας μόλυνσης, μην περιμένετε για φωτεινά συμπτώματα. Θα πρέπει να εξετάζεται, να εξετάζεται και να αρχίζει εγκαίρως η θεραπεία.

PCR διάγνωση της φυματίωσης σε παιδιά και ενήλικες: ενδείξεις για

Ο Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας αναγνώρισε πριν από 20 χρόνια ότι ο ρυθμός εξάπλωσης της φυματίωσης ήταν εκτός ελέγχου και έφθασε σε κλίμακα επιδημίας. Έκτοτε, η κατάσταση δεν βελτιώθηκε. Περισσότερα από ένα εκατομμύριο κρούσματα της νόσου διαγιγνώσκονται κάθε χρόνο, εκ των οποίων σχεδόν το ένα τέταρτο είναι θανατηφόρο. Την τελευταία δεκαετία, η συχνότητα εμφάνισης των παιδιών έχει αυξηθεί, οι περισσότερες μορφές της νόσου δεν προσφέρονται για συνήθη θεραπεία με αντιβιοτικά.

Σήμερα, ένα από τα παγκόσμια καθήκοντα για την ιατρική είναι η ανάπτυξη τέτοιων διαγνωστικών μεθόδων που θα επιτρέψουν την ταυτοποίηση της παθολογίας πριν από την εμφάνιση έντονων κλινικών συμπτωμάτων. Ένας από αυτούς είναι η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) για τη φυματίωση, η οποία βοηθά στην ανίχνευση ραβδιών που προκαλούν ασθένεια Koch στο αίμα, στα πτύελα και σε άλλα βιολογικά υγρά.

Διάγνωση της φυματίωσης

Οι εξετάσεις ελέγχου αποσκοπούν στην ανίχνευση ασθενών, φορέων φυματίωσης και πρόληψης της εξάπλωσης της λοίμωξης στην κοινωνία. Για τα παιδιά ηλικίας κάτω των 14 ετών, η δοκιμασία Mantoux χρησιμοποιείται μαζικά. Πρόκειται για μια ανοσολογική δοκιμασία στην οποία μια δόση φυματίνης εγχέεται υποδόρια - ένα σύνθετο μείγμα του γενετικού υλικού πολλών τύπων μυκοβακτηριδίων. Η εμφάνιση μιας έντονης αντίδρασης υποδεικνύει μια ενεργό μολυσματική διαδικασία.

Για προληπτική εξέταση σε ενήλικες που χρησιμοποιούν φθορίωση ή ακτίνες Χ. Αυτές οι μέθοδοι συμβάλλουν στην απεικόνιση των παθολογικών βλαβών στον πνευμονικό ιστό. Παρόλα αυτά, προκαλεί δυσκολίες στη διαφοροποίηση της φυματίωσης από μια άλλη οργανική παθολογία (κακοήθη και καλοήθη νεοπλάσματα, φλεγμονώδεις διεργασίες, παρασιτικές επιδρομές, επαγγελματική πνευμονική βλάβη).

Για να αποσαφηνιστεί η δομή και το μέγεθος της παθολογικής εστίασης, ενδέχεται να χρειαστούν επιπρόσθετες οργανικές μελέτες:

• στοχευμένη ακτινογραφία.
• υπολογιστική τομογραφία.
• απεικόνιση μαγνητικού συντονισμού.

Μέθοδοι διάγνωσης της φυματίωσης

Στην περίπτωση αμφιλεγόμενων αποτελεσμάτων και για το διορισμό κατάλληλης θεραπείας, υπάρχει ανάγκη για ακριβέστερες διαγνωστικές μεθόδους που καθιστούν δυνατή την απομόνωση του παθογόνου παράγοντα. Μικροσκοπική και βακτηριολογική εξέταση των πτυέλων χρησιμοποιείται για την επιβεβαίωση των πνευμονικών μορφών φυματίωσης για μεγάλο χρονικό διάστημα.

Τα τελευταία χρόνια, η συχνότητα εμφάνισης μυκοβακτηριδίου διαφόρων οργάνων και συστημάτων - νεφρών, οστών, εντέρων, δέρματος - έχει γίνει συχνότερη. Για τον εντοπισμό αυτών των μορφών φυματίωσης, υπερηχογραφικών εξετάσεων, καλλιέργειας ούρων και περιττωμάτων, μπορούν να χρησιμοποιηθούν ενδοσκοπικές εξετάσεις.

Η διάγνωση της ΡΒΚ για τη φυματίωση θα βοηθήσει στην επιβεβαίωση της παρουσίας ραβδιών Koch στο αίμα, καθώς και της ευαισθησίας της σε ορισμένα φάρμακα. Αυτή είναι μια πολύ αποτελεσματική μέθοδος που βασίζεται στην ανίχνευση του βακτηριακού γενετικού υλικού σε διάφορα βιολογικά υγρά.

Ειδικότητα και ενδείξεις

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης είναι μια πολύ ευαίσθητη μικροβιολογική διαγνωστική μέθοδος, η οποία βασίζεται στις αρχές της γενετικής μηχανικής. Για να επιβεβαιωθεί η παρουσία ενός παθογόνου παράγοντα σε ένα βιολογικό υλικό, αρκεί να ανιχνευθεί ένα μοναδικό θραύσμα νουκλεϊκού οξέος γι 'αυτό. Η PCR για τη φυματίωση μπορεί να ανιχνεύει τα βακτήρια στο αίμα, τα πτύελα, τα ούρα.

Προς το παρόν, ανέπτυξε διάφορες μεθόδους ανάλυσης. Τα πιο δημοφιλή μεταξύ τους είναι τα εξής:

• PCR σε πραγματικό χρόνο.
• τεχνολογία μικρορευστών ·
• την αλληλούχιση και την πυροεπιλογή.

PCR σε πραγματικό χρόνο

Τα εργαστήρια χρησιμοποιούν συχνότερα αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο, καθώς μειώνουν τον αριθμό των ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων και η ίδια η διαδικασία ανάλυσης διαρκεί λίγο χρόνο.

Δεδομένου του μεγάλου αριθμού κρυφών μορφών της νόσου και της αναποτελεσματικότητας των τυποποιημένων διαγνωστικών μεθόδων, η PCR χρησιμοποιείται όλο και περισσότερο. Ο σκοπός αυτής της ανάλυσης παρουσιάζεται σε:

• τον εντοπισμό ύποπτων περιοχών στην ακτινογραφία.
• αμφισβητήσιμα αποτελέσματα δοκιμασίας φυματίνης.
• η αδυναμία διεξαγωγής μικροσκοπικής και βακτηριολογικής ανάλυσης πτύων σε άτομα σε σοβαρή κατάσταση ·
• διεξαγωγή χειρουργικών επεμβάσεων όταν είναι απαραίτητο να εξασφαλιστεί γρήγορα ότι δεν υπάρχει μόλυνση.
• το απαράδεκτο της χρήσης φθορογραφίας, ακτίνων Χ ή υπολογιστικής τομογραφίας (για παράδειγμα, σε εγκύους και θηλασμού, σε περιπτώσεις υπερβολικής έκθεσης στην ακτινοβολία) ·
• υποψία εξωπνευμονικής φυματίωσης (συνιστάται να χρησιμοποιείται όχι μόνο το αίμα αλλά και το φλέγμα).

Η διάγνωση της φυματίωσης από την PCR έχει αποδειχθεί στην εξέταση των παιδιών, λόγω της έλλειψης πρόσθετης έκθεσης και των ταχέων αποτελεσμάτων.

Διαδικασία προετοιμασίας και ανάλυσης

Δεν απαιτείται ειδική προετοιμασία για PCR αίματος. Ωστόσο, για να αποφευχθούν οι επιπλοκές της δειγματοληψίας αίματος και για να ληφθεί υλικό υψηλής ποιότητας, πρέπει να ακολουθούνται οι ακόλουθοι γενικοί κανόνες:

• η ανάλυση πρέπει να λαμβάνεται το πρωί όχι νωρίτερα από 2 ώρες μετά το ξύπνημα.
• Πρέπει να περιορίζει την πρόσληψη λιπαρών και τηγανισμένων τροφών την ημέρα πριν από τη δειγματοληψία αίματος.
• αποφεύγετε να τρώτε, τσάι και καφέ για 8-9 ώρες, επιτρέπεται να πίνετε καθαρό νερό,
• Μην καπνίζετε για τουλάχιστον 3-4 ώρες.

Σε περίπτωση μόνιμης φαρμακευτικής αγωγής (ορμόνες, αντιπηκτικά, αντιφλεγμονώδη φάρμακα, αντιβιοτικά, αραιωτικά αίματος), πρέπει να ενημερώσετε σχετικά τον εργαστηριακό βοηθό.

Κατά την παράδοση των πτυέλων, θα πρέπει να βουρτσίζετε τα δόντια σας καλά και να ξεπλένετε το στόμα σας αρκετές φορές. Συλλέξτε υλικό σε αποστειρωμένο δοχείο. Για καλύτερα αποτελέσματα, μπορεί να ληφθεί αποχρεμπτικό ή βλεννολυτικό μέσο το βράδυ.

Η ίδια η διάγνωση αποτελείται από διάφορα στάδια.

Υλικό φράχτη. Μπορεί να πραγματοποιηθεί στο εργαστήριο και εξ αποστάσεως. Ορισμένοι τύποι υλικού που ο ασθενής συλλέγει ανεξάρτητα (ούρα, φλέγμα).

Η καταστροφή της δομής των νουκλεϊνικών οξέων (μετουσίωση μορίων DNA και RNA). Για να γίνει αυτό, το υλικό δοκιμής θερμαίνεται σε θερμοκρασία 98 μοίρες και διατηρείται για αρκετά λεπτά. Ως αποτέλεσμα, η διπλή έλικα ξετυλίγεται, σχηματίζονται μονόκλωνα μόρια.

Ανόπτηση Μετά την προσθήκη ενός εκκινητή (μικρού τμήματος νουκλεϊκού οξέος), η θερμοκρασία μειώνεται κατά αρκετούς βαθμούς, ενεργοποιείται η πολυμεράση.

Αναγνώριση. Η θερμοκρασία φτάνει στο βέλτιστο επίπεδο, η δραστικότητα του ενζύμου φτάνει στο μέγιστο και η δεύτερη αλυσίδα ολοκληρώνεται σύμφωνα με τον κανόνα της συμπληρωματικότητας Chargaff.

Για να ολοκληρωθεί η μελέτη, είναι απαραίτητο να συντεθεί ο απαιτούμενος αριθμός μορίων DNA - περίπου 50 κύκλοι της παραπάνω αντίδρασης. Χρειάζονται περίπου 2-3 ​​ώρες. Ένα θετικό αποτέλεσμα της αντίδρασης δεν δείχνει πάντα το ενεργό στάδιο της νόσου, αλλά είναι ένας δείκτης της παρουσίας ενός μικροοργανισμού στο σώμα.

Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα της μεθόδου

Σε σύγκριση με άλλες μικροβιολογικές μεθόδους, η PCR δεν απαιτεί πολύ χρόνο για να ανιχνεύσει το Mycobacterium tuberculosis χρησιμοποιώντας PCR, το αποτέλεσμα μπορεί να ληφθεί την ημέρα της δοκιμής.

Ένα άλλο πλεονέκτημα είναι η υψηλή εξειδίκευση της ανάλυσης, η οποία καθιστά δυνατή την ανίχνευση της παρουσίας του παθογόνου παράγοντα με ακρίβεια 90-95% σε σχεδόν οποιοδήποτε βιολογικό υλικό (αίμα, ούρα, κόπρανα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, πτύελα, έκπλυση βρόγχων).

Ωστόσο, υπάρχουν πολλά μειονεκτήματα της μεθόδου:

• ένα μάλλον υψηλό ποσοστό ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων (έως και 15%), που συνδέεται με την ανίχνευση μη ζωντανών μικροοργανισμών.
• σε ορισμένες περιπτώσεις, μπορείτε να παραλείψετε το γεγονός της ασθένειας, καθώς το Mycobacterium tuberculosis συχνά υποβάλλεται σε μεταλλάξεις και αλλαγές γενετικού υλικού του.
• χαμηλή αποτελεσματικότητα στην εξέταση ατόμων με ανοσοανεπάρκεια ·
• το υψηλό κόστος της έρευνας, την ανάγκη για ακριβό εξοπλισμό και αντιδραστήρια.

Τι μπορεί να αντικατασταθεί;

Δεδομένης της ποικιλίας μορφών μόλυνσης από φυματίωση, για πιο ακριβή διάγνωση και επιλογή θεραπείας είναι απαραίτητο να συνδυαστούν διάφορες διαγνωστικές μελέτες:

Υποχρεωτική ανάλυση για παιδιά είναι η δοκιμή Mantoux. Εάν η εισαγωγή της φυματίνης (γενετικό υλικό των μυκοβακτηριδίων) εμφανίζει έντονη αντίδραση, μπορεί να θεωρηθεί λοίμωξη με βακίλο φυματίωσης.

Οι μέθοδοι ακτίνων Χ μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την απεικόνιση της παθολογικής εστίασης. Στη διάγνωση της εξωπνευμονικής φυματίωσης, χρησιμοποιούνται ενδοσκοπικές μέθοδοι με ταυτόχρονη βιοψία:

• η βρογχοσκόπηση βοηθά στην αναγνώριση των βλαβών του λάρυγγα, της τραχείας, των βρόγχων.
• κολονοσκόπηση - έντερα.
• κυστεουρεθροσκόπηση - όργανα του ουροποιητικού συστήματος.
• Υστεροσκόπηση - γυναικεία γεννητικά όργανα. Αυτές οι μέθοδοι δεν είναι συγκεκριμένες, για την ακριβή διάγνωση, πρέπει να εντοπιστεί ο παθογόνος παράγοντας.

Οι γενικές κλινικές δοκιμές θα βοηθήσουν στον πιο συγκεκριμένο προσδιορισμό της κατάστασης του σώματος. Απαιτείται πλήρης αιμοληψία με τύπο λευκοκυττάρων.

Η αύξηση του αριθμού των ουδετερόφιλων με μειωμένο επίπεδο λεμφοκυττάρων και η αύξηση του ποσοστού καθίζησης των ερυθροκυττάρων (ESR) υποδεικνύει μια ενεργή φλεγμονώδη διαδικασία βακτηριακής αιτιολογίας. Αποκλείστε τη βλάβη στα όργανα του ουροποιητικού συστήματος χρησιμοποιώντας μια γενική ανάλυση ούρων και καλλιέργεια για αποστείρωση.

Η PCR είναι σήμερα διαθέσιμη στα περισσότερα ιδιωτικά εργαστήρια. Αυτό απαιτεί όχι μόνο υψηλά ειδικευμένους ειδικούς, αλλά και ακριβό εξοπλισμό, μεγάλο αριθμό αντιδραστηρίων. Ως εκ τούτου, η χρήση αυτής της μεθόδου είναι περιορισμένη παρά την υψηλή ακρίβεια και την ειδικότητά της.

Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα της PCR (α) για τη διάγνωση της φυματίωσης

Μια ειδική μόλυνση από φυματίωση υπάρχει εδώ και πολλά χρόνια σε ανθρώπινους ιστούς και δομές και υπό ορισμένες συνθήκες εξαπλώνεται γρήγορα σε όλο το σώμα σε 2-3 μήνες. Μερικές φορές η καλύτερη πορεία θεραπείας είναι πολύ δύσκολο να επιλέξει λόγω της καθυστερημένης διάγνωσης και προσαρμογής του παθογόνου σε πολλά φάρμακα.

Η πιο πρόσφατη διάγνωση της φυματίωσης PCR βοηθά στην ανίχνευση όχι μόνο της αναπτυγμένης ασθένειας, αλλά και του ίδιου του παθογόνου παράγοντα, όταν τα πρώτα σημάδια της νόσου δεν έχουν ακόμη εμφανιστεί.

Τι είναι το PCR;

Η διάγνωση της φυματίωσης με PCR έχει εμφανιστεί πρόσφατα. Το 1983, ένας μικροβιολόγος από την Αμερική, Cary Mullis, εφευρέθηκε μια διαδικασία με την οποία οι μικροοργανισμοί θα μπορούσαν να αναδημιουργηθούν από βιολογικό υλικό σε ένα μικρό τμήμα. Αυτό το έργο έχει κερδίσει το βραβείο Νόμπελ.

Η PCR για τη φυματίωση είναι μια διαδικασία πολυμερούς αλυσίδας στην οποία η διάγνωση και η ανίχνευση των ιικών παθογόνων με γενετική μηχανική. Η τεχνική χρησιμοποιείται σε ανοσολογικά, μικροβιολογικά, ιολογικά και βιοχημικά εργαστήρια.

Η καθολική μέθοδος βοηθά τους γιατρούς να διαγνώσουν και να εντοπίσουν μια μολυσματική διαδικασία ακόμη και μετά τις πρώτες ώρες της μόλυνσης, πολύ πριν την εμφάνιση των συμπτωμάτων. Η έρευνα είναι εφικτή ακόμη και με μια μικρή ποσότητα βιομάζας.

Τι χρειάζεται για την ανάλυση;

• Αρκετά τμήματα του DNA (εναρκτήρες), με τα οποία αρχίζει η βιολογική σύνθεση.
• Νουκλεοτιδικές ενώσεις, η βάση του μορίου DNA ή RNA.
• Ένα ένζυμο πολυμεράσης που επιταχύνει την ανάλυση PCR.

Ποια είναι η βάση της μεθόδου;

Αρχικά, ένα τμήμα DNA εξάγεται από ένα βιολογικό υλικό από ένα μολυσμένο άτομο, χρησιμοποιώντας τις μεθόδους γονιδιακής μοριακής βιοσύνθεσης, προσδιορίζεται περαιτέρω ο τύπος των μικροοργανισμών στους οποίους ανήκει το βιοφρακτικό.

Αυτή η σύνθετη αντίδραση απαιτεί λιγότερο χρόνο από μερικά βιομετρικά. Η PCR προσδιορίζει το παθογόνο σε λίγες ώρες, ενώ δεν χρειάζεται να το απομονώσει από ένα βιολογικό υγρό (πτύελα, εγκεφαλονωτιαίο ή αιματικό μέσο), δεν είναι απαραίτητο να αναπτυχθεί για μεγάλο χρονικό διάστημα σε θρεπτικό μέσο. Αρκεί το υλικό που μελετάται να περιέχει ένα κλώνο DNA μολυσματικού παθογόνου.

Όταν διεξάγεται δοκιμασία αίματος PCR για φυματίωση in vitro, η σύνθεση των ριβονουκλεϊνικών οξέων του mycobacterium tuberculosis δημιουργείται τεχνητά.

Στάδια διάγνωσης

Η μοριακή αντίδραση με PCR είναι μια απλή διαδικασία που χρειάζεται λίγο χρόνο. Λαμβάνεται το απαραίτητο βιολογικό υλικό: για τον προσδιορισμό της tbc χρησιμοποιείται αίμα, πτύελα, βρογχικό υγρό πλύσης.

1. Πρώτον, καταστρέφεται η πρωτογενής μορφή DNA, 2 αλυσίδες διαχωρίζονται σε υψηλή θερμοκρασία (μέγιστη 98 ° C για όχι περισσότερο από 2 λεπτά).
2. Κατόπιν πραγματοποιείται ανόπτηση, η πρωτεύουσα θερμοκρασία μειώνεται από αρκετές διαιρέσεις, ο κλώνος DNA συνδέεται με τον εκκινητή.
3. Το επόμενο στάδιο ονομάζεται επιμήκυνση, με τη βιοσύνθεση των απαραίτητων μοριακών δομών.

Για να ληφθεί ο απαιτούμενος αριθμός αντιγράφων του DNA, από 25 έως 30 τέτοιου είδους κύκλοι πρέπει να περάσουν και ο προκύπτων αριθμός μυκοβακτηρίων αναγνωρίζεται εύκολα.

Είναι απαραίτητο να γίνει PCR για φυματίωση;

Απευθείας σε όλους τους ασθενείς με υποψία TVC, η διάγνωση της αλυσίδας δεν γίνεται, καθώς η διαδικασία απαιτεί τη χρήση δαπανηρού εξοπλισμού. Δεν επιτρέπουν όλα τα ιατρικά κρατικά ιδρύματα να αγοραστούν, ειδικά επειδή οι συνήθεις μέθοδοι διάγνωσης του μυκοβακτηριδίου tuberculosis είναι επίσης ενημερωτικές.

• Προσεκτική λήψη ιστορικού, αμφισβήτηση του ασθενούς.
• Εξωτερική εξέταση.
• Δοκιμή φυματίνης Mantoux.
• Ακτινογραφική ή φθορολογική εξέταση.
• Εάν είναι απαραίτητο, διάγνωση υπολογιστών.
• Μικροσκοπική ή βακτηριολογική εξέταση της μάσκας με πτύελα.

Η PCR για τη φυματίωση γίνεται μόνο όταν δεν είναι δυνατόν να εκτελεστεί άλλη οργανική ανάλυση ή σε περιπτώσεις που είναι δύσκολο να διαγνωσθεί.

Παρά το γεγονός ότι έχουν επινοηθεί πολλοί διαγνωστικοί τρόποι, ο αριθμός των ασθενών με φυματίωση συνεχίζει να αυξάνεται. Επιπλέον, η επίπτωση έχει αποκτήσει ορισμένα χαρακτηριστικά: παρατηρείται συχνά μια σοβαρή μορφή της νόσου, ο αριθμός των θανάτων αυξάνεται, ο παθογόνος οργανισμός καθίσταται ανθεκτικός στα υπάρχοντα φάρμακα χημειοθεραπείας.

Πολλοί άνθρωποι δεν θέλουν να υποβάλλονται σε καθημερινή επιθεώρηση, αρνούνται τον εμβολιασμό, γεγονός που οδηγεί σε αύξηση της συχνότητας εμφάνισης. Αυτές οι περιστάσεις απαιτούν αποτελεσματικές και ενημερωτικές ερευνητικές μεθόδους διαθέσιμες για ενήλικες και παιδιά που έχουν διαγνωστεί με tbc. Η PCR έχει πλεονεκτήματα έναντι άλλων διαγνωστικών μεθόδων.

Ποια είναι η αξία της μεθόδου;

Αυτή η τελευταία έρευνα έχει αποδειχθεί καλά. Εάν για διάφορους λόγους είναι δύσκολο να γίνει διάγνωση ή, σε ορισμένες αμφιλεγόμενες περιπτώσεις, η PCR ανιχνεύει τον βακίλο του φυματιδίου ευκολότερα σε βιολογικό υλικό από άλλες μεθόδους.

• Αυτή η ταχεία μελέτη, ένα μικρό τμήμα του μορίου, καθιστά δυνατή την ακριβή διάγνωση σε σύντομο χρονικό διάστημα σε περίπου 5 ώρες, αυτό χρησιμοποιείται σε περιπτώσεις έκτακτης ανάγκης, για παράδειγμα, πριν από επείγουσα χειρουργική επέμβαση.
• Ένας έλεγχος αίματος για φυματίωση είναι δυνατός όταν δεν υπάρχουν διαθέσιμες ή αντενδείκνυται άλλες μέθοδοι - μερικές φορές για την ανίχνευση του παθογόνου παράγοντα tbc, πρέπει να ληφθούν πολλά Rg-πλάνα, η δόση ακτινοβολίας είναι πολύ μεγάλη.
• Χρησιμοποιώντας την αντίδραση πολυμεράσης, οποιαδήποτε βιολογικά υγρά μπορούν να εξεταστούν για την παρουσία μυκοβακτηρίων. Για παράδειγμα, μπορείτε να πραγματοποιήσετε μια μελέτη του εγκεφαλονωτιαίου υγρού με φυματιώδη μηνιγγίτιδα ή ούρα με ουρογεννητική φυματίωση.
• Η μέθοδος είναι ασφαλής, η διάγνωση της φυματίωσης σε παιδιά που χρησιμοποιούν PCR δεν προκαλεί δυσκολίες.
• Η μέθοδος αντίδρασης πολυμερούς αποκαλύπτει ένα βακίλο του φυματιδίου σε οποιαδήποτε μορφή και στάδια της νόσου.
• Η παρουσία μόνο λίγων βακτηρίων στο βιολογικό υλικό σας επιτρέπει να δείτε την παρουσία μικροοργανισμών, καθώς αυτή είναι μια ευαίσθητη αντίδραση.
• Η PCR εύκολα διαγνώσει την υποτροπή της νόσου.

Παρά τον τεράστιο αριθμό των πλεονεκτημάτων, όλοι οι ασθενείς με καχυποψία για μελέτη tbc δεν γίνονται, καθώς υπάρχουν και μειονεκτήματα, και αυτά λαμβάνονται επίσης υπόψη.

Βίντεο

Βίντεο - έγκαιρη διάγνωση

Ποια είναι τα μειονεκτήματα;

Αυτή η μέθοδος διάγνωσης είναι μάλλον εξαιρετική από τη φυσική, γι 'αυτό υπάρχουν λόγοι. Καταρχάς, λαμβάνεται υπόψη το υψηλό κόστος της μεθόδου. Ο εξοπλισμός είναι ακριβός, οι δημόσιες κλινικές δεν έχουν την ευκαιρία να το αγοράσουν λόγω της υψηλής τιμής, αλλά τα περισσότερα από τα καταβαλλόμενα εργαστήρια διαθέτουν τον εξοπλισμό, αναλύονται.

• Η μέθοδος ανιχνεύει νεκρά βακτήρια που έχουν πεθάνει μετά τη θεραπεία, ενώ η PCR δείχνει θετικό αποτέλεσμα. Αμέσως μετά τη χημειοθεραπεία, δεν έχει νόημα η διεξαγωγή μελέτης, δεδομένου ότι το αποτέλεσμα θα είναι αναξιόπιστο.
• Οι μεταλλάξεις Mycobacterium tuberculosis είναι ευαίσθητες, γεγονός που οδηγεί σε αναποτελεσματικότητα της μεθόδου και ο κλώνος DNA δεν μπορεί να συντεθεί σταθερά.

Το περιβάλλον για τη μελέτη θα πρέπει να επιλεγεί προσεκτικά · το αίμα ή τα ούρα μπορούν να συλλεχθούν μόνο εάν υπάρχει υποψία μόλυνσης. Τα πτύελα δεν πρέπει να λαμβάνονται για εξέταση εάν υπάρχουν υπόνοιες για φυματίωση των οστών. Σε αυτή την περίπτωση, η διάγνωση θα είναι λανθασμένη.

Το αίμα και τα ούρα ενός ασθενούς με φυματίωση που πρόκειται να μελετηθεί με PCR λαμβάνονται σπανίως, ο προσδιορισμός της νόσου με αυτόν τον τρόπο είναι αμφισβητήσιμος. Σε αυτά τα βιολογικά μέσα, ο παθογόνος παράγοντας προσδιορίζεται μόνο σε σήψη ή στην περίπτωση διαδεδομένης φυματίωσης. Οι τοπικές μορφές είναι συνηθέστερες, με το αίμα και τα ούρα να παραμένουν αμετάβλητες. Τις περισσότερες φορές, το φλέγμα λαμβάνεται για εξέταση.

Ποιος παρουσιάζει την ανάλυση;

Οι περισσότεροι ασθενείς αποστέλλονται για διάγνωση PCR σε αμφιλεγόμενες και δύσκολες περιπτώσεις φυματίωσης. Πότε οι επαγγελματίες του ιατρικού τομέα εκδίδουν παραπομπές για έρευνα;

1. Εάν υπάρχει επαφή με άτομο με αξιόπιστη διάγνωση φυματίωσης, αλλά είναι δύσκολο να γίνει διάγνωση με συμβατικές μεθόδους.
2. Υπό αυτές τις συνθήκες, αν ο ασθενής να παρέχει την κλινική είναι αδύνατη για ακτινογραφία ή άλλη έρευνα. Σε μια τέτοια κατάσταση, είναι ευκολότερο να επιθεωρηθεί χρησιμοποιώντας τη μέθοδο του πολυμερούς. Η ανάλυση των πτυέλων παραδίδεται απλά στο εργαστήριο σε ειδικό δοχείο και το αποτέλεσμα γίνεται γνωστό μετά από λίγες ώρες.
3. Πριν από τη λειτουργία, είναι επειγόντως απαραίτητο να προσδιοριστεί εάν ο ασθενής είναι άρρωστος με φυματίωση, οπότε ενδείκνυται η PCR.
4. Λόγω της ασφάλειας της μεθόδου, είναι δυνατή η διεξαγωγή έρευνας σε εγκύους ή παιδί, χωρίς να δημιουργηθεί πρόσθετο φορτίο ακτίνων Χ.
5. Αμφιβολία τα αποτελέσματα των δοκιμών Mantoux.

Οποιοσδήποτε επιθυμεί μπορεί να υποβληθεί σε εξέταση για αμοιβή, αν η φυματίωση δεν έχει επιβεβαιωθεί με τη βοήθεια της βακτηριολογίας και της ακτινοσκόπησης. Αυτό συμβαίνει εάν η βλάβη στον ιστό του πνεύμονα είναι αόρατη στην εικόνα Rg σε μια άμεση προβολή και ο ασθενής αδυνατεί να συλλέξει ορθά τα πτύελα, αλλά τα σημάδια της φυματίωσης του ανθρώπου διαταράσσονται.

Η σύγχρονη αντίδραση PCR για τη διάγνωση είναι το κλειδί για την επιτυχή θεραπεία, με αποτέλεσμα να μειώνεται ο επιπολασμός της νόσου. Οι παραδοσιακές μέθοδοι ταυτοποίησης των παθήσεων δεν παράγουν πάντα το επιθυμητό αποτέλεσμα.

Επομένως, η ανάλυση PCR μέχρι σήμερα έχει καταστεί μία από τις αξιόπιστες και ασφαλείς μεθόδους διάγνωσης στα αρχικά στάδια της νόσου.